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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 做过ＲＡＣＥ的朋友进来讨论一下
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schmyly

木虫 (小有名气)

[交流] 做过ＲＡＣＥ的朋友进来讨论一下

我在做斑马鱼一个基因的ＲＡＣＥ，可是每次都得不到特异的扩增条带，有经验的朋友来谈谈ＲＡＣＥ有哪些需要注意的吧，不胜感谢！
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1楼 2008-04-17 21:06:13
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annwt

木虫 (正式写手)
作一次光加接头引物的，看结果再分析，
2.5K的确不短，LA酶吗？
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5楼2008-04-18 11:40:59
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annwt

木虫 (正式写手)
一般是模板问题，就是反转录不到头，所以提RNA要小心，如果降解的多就可以多些作反转录cDNA，以量取胜，检测可以了就剩下PCR条件，可以先温度低些，有带出现，再提高温度，找特异性带，你的非特异扩增可能是PCR条件的问题，如果模板没有问题就梯度，降落都试试吧！
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2楼2008-04-17 22:26:26
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guozhongbaono1

木虫 (正式写手)
听有经验的人说，RACE大都很难扩出特异性带！要是你要的目的片段很亮！可以尝试一下回收！！！
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快乐是一天，不快乐也是一天，为何不天天快乐昵~~~
3楼2008-04-18 09:35:29
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schmyly

木虫 (小有名气)
哎，我梯度和降落都做了，还是不出现特异性带!用我的基因特异性引物又能扩到目的序列，说明cDNA没有问题。但是一用基因特异性引物和接头引物就扩得乱七八糟的啊！我再想是不是接头引物的特异性太差，或者是我RACE的片断太长了，有2.5k左右。
欢迎大家提出宝贵意见啊！
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4楼2008-04-18 11:15:59
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