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schmyly

木虫 (小有名气)

[交流] 做过RACE的朋友进来讨论一下

我在做斑马鱼一个基因的RACE,可是每次都得不到特异的扩增条带,有经验的朋友来谈谈RACE有哪些需要注意的吧,不胜感谢!
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schmyly

木虫 (小有名气)

哎,我梯度和降落都做了,还是不出现特异性带!用我的基因特异性引物又能扩到目的序列,说明cDNA没有问题。但是一用基因特异性引物和接头引物就扩得乱七八糟的啊!我再想是不是接头引物的特异性太差,或者是我RACE的片断太长了,有2.5k左右。
欢迎大家提出宝贵意见啊!
4楼2008-04-18 11:15:59
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annwt

木虫 (正式写手)

一般是模板问题,就是反转录不到头,所以提RNA要小心,如果降解的多就可以多些作反转录cDNA,以量取胜,检测可以了就剩下PCR条件,可以先温度低些,有带出现,再提高温度,找特异性带,你的非特异扩增可能是PCR条件的问题,如果模板没有问题就梯度,降落都试试吧!
2楼2008-04-17 22:26:26
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guozhongbaono1

木虫 (正式写手)

听有经验的人说,RACE大都很难扩出特异性带!要是你要的目的片段很亮!可以尝试一下回收!!!
快乐是一天,不快乐也是一天,为何不天天快乐昵~~~
3楼2008-04-18 09:35:29
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annwt

木虫 (正式写手)

作一次光加接头引物的,看结果再分析,
2.5K的确不短,LA酶吗?
5楼2008-04-18 11:40:59
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