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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 层析/纯化 » 有关GE的HiTrap DEAE FF的使用问题
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zwt369

铜虫 (小有名气)

[求助] 有关GE的HiTrap DEAE FF的使用问题 已有1人参与

各位纯化方面的大侠，想请教一些关于HiTrap DEAE FF预装柱（1ml）的一些使用问题
最近在摸索一混合蛋白的纯化
1. 用了HiTrap DEAE FF，先选择一根新的小柱，发现洗脱峰只有一个，而用Q柱能分到3个峰，是否证明Q柱更适合这种样品？
2. 对HiTrap DEAE FF进行第二次试验的时候发现小柱好像进气泡了，无论是压力还是电导等参数都呈现不稳定的状态，我想问一下这种预装柱进了气泡是否只能报废，有没有补救的方法？
3. 由于小柱进气泡，我就新开了一支HiTrap DEAE FF，但是发现这根柱子的紫外吸收有异常，用平衡液平衡了好久依旧回不到基线，用含有1MNaCl的B洗脱，出现很多尖锐的洗脱峰，紫外吸收的数值变化范围大且快，最后用100%B后回到100%A依旧是洗不回基线，这是一根新柱，不知道问题出哪了？难道要用NaOH原位清洗的方法？
这几个问题一直困扰我，希望大家踊跃解答，不甚感激！
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学无止尽，永远努力！
1楼 2014-09-01 11:16:30
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1020490511

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

DEAE的选择性不如Q柱。如果进的是小气泡用抽虑抽气的水可以冲出来。大气泡就比较麻烦。

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2楼2014-09-09 18:03:28
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zwt369

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 1020490511 at 2014-09-09 18:03:28
DEAE的选择性不如Q柱。如果进的是小气泡用抽虑抽气的水可以冲出来。大气泡就比较麻烦。

怎么用抽滤抽气的水冲出来呢，不是很明白。
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学无止尽，永远努力！
3楼2014-09-10 13:41:50
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1020490511

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by zwt369 at 2014-09-10 13:41:50
怎么用抽滤抽气的水冲出来呢，不是很明白。...

上柱子的水都得过滤虑抽气啊～不然会堵柱子和产生气泡。

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4楼2014-09-11 08:52:21
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