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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 层析/纯化 » DEAE - sephadex A -50 急求处理方法和试验中遇到问题的解决办法
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小政搞科研

新虫 (初入文坛)

[求助] DEAE - sephadex A -50 急求处理方法和试验中遇到问题的解决办法 已有1人参与

刚购置了19g瑞典进口的DEAE-sephadex A -50，直接用1L蒸馏水和19g胶粒混合，发现迅速溶胀成极其黏稠的胶体，随即再加入大量蒸馏水。然后与0.02M的Tris-Hcl在沸水中热胀。装住过程中发现凝胶悬浮液在缓冲液中沉降速度好慢，平衡更是慢，一般需要平衡12个小时左右。加样：样液在柱床上沉积的好慢，基本不会和柱床融合。急求各位大神此胶的处理方法和做过此类层析的大神指导点拨。拜谢！！
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1楼 2014-08-31 10:57:42
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帖航

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小政搞科研: 金币+5, ★★★★★最佳答案 2014-09-04 17:31:16
首先新买的填料，溶胀后要用酸碱共洗的，19g胶粒要用2L蒸馏水溶胀。还有看你所述你应该用的是常规的低压层析吧，如果是AKTA增加压力就可以了。
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2楼2014-09-01 08:23:58
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小政搞科研

新虫 (初入文坛)
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2楼: Originally posted by 帖航 at 2014-09-01 08:23:58
首先新买的填料，溶胀后要用酸碱共洗的，19g胶粒要用2L蒸馏水溶胀。还有看你所述你应该用的是常规的低压层析吧，如果是AKTA增加压力就可以了。

谢谢大神的回复。我们后来加了很多水溶胀，发现太稀就用水浴煮沸把水蒸干。后来加了tris就上柱了。我们的是上海沪西厂生产的柱层析装置，应该就是您说的低压层析。这几天一直做，一次也没出过峰，好郁闷。
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3楼2014-09-04 17:30:45
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帖航

银虫 (小有名气)
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3楼: Originally posted by 小政搞科研 at 2014-09-04 17:30:45
谢谢大神的回复。我们后来加了很多水溶胀，发现太稀就用水浴煮沸把水蒸干。后来加了tris就上柱了。我们的是上海沪西厂生产的柱层析装置，应该就是您说的低压层析。这几天一直做，一次也没出过峰，好郁闷。...

如果想得到具体的建议，你需要提供，你蛋白的性质（等电点，分子量），缓冲液成分（离子强度及pH，这个很重要），柱床尺寸，流速，运行温度，上样量等，数据越全越好，你说一个没有峰没法给你建议。如果基线一直是平的，建议你用其他蛋白试试，看看有没有峰。
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4楼2014-09-05 09:43:56
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帖航

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 小政搞科研 at 2014-09-04 17:30:45
谢谢大神的回复。我们后来加了很多水溶胀，发现太稀就用水浴煮沸把水蒸干。后来加了tris就上柱了。我们的是上海沪西厂生产的柱层析装置，应该就是您说的低压层析。这几天一直做，一次也没出过峰，好郁闷。...

还有，水多了就把胶粒沉淀下去把水倒掉，凝胶一般是不能煮沸的，容易破损，加热溶胀也是加热到80度的，煮沸这个太危险
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5楼2014-09-05 09:46:57
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小政搞科研

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 帖航 at 2014-09-05 09:43:56
如果想得到具体的建议，你需要提供，你蛋白的性质（等电点，分子量），缓冲液成分（离子强度及pH，这个很重要），柱床尺寸，流速，运行温度，上样量等，数据越全越好，你说一个没有峰没法给你建议。如果基线一直是 ...

蛋白质的性质不清楚，分子量大概是50KD,缓冲液是PH为6.8的Tris-Hcl缓冲液，柱床是40*1，流速是0.3ml/min，温度是室温，上样量比较随意，大约是柱床的十分之一。这两天有事，回复的晚了，抱歉
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6楼2014-09-09 10:36:34
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