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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)
引用回帖:
16楼: Originally posted by luchao507 at 2014-08-28 19:33:02
载体1微升 目的基因4微升 T4连接酶和buffer怎么加呢？用它俩代替sloution能行吗？...

你把你的载体、片段的大小和浓度写下来我看看
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21楼2014-08-28 22:21:39
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luchao507

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22楼2014-08-29 08:51:10
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luchao507

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23楼2014-08-29 08:55:00
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luchao507

禁虫 (小有名气)
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24楼2014-08-29 09:01:14
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)
引用回帖:
24楼: Originally posted by luchao507 at 2014-08-29 09:01:14
载体PMD18T 3692bp 50ng/微升   片段1400bp 浓度不清楚 电泳两微升比maker 亮...

载体PMD18T 3692bp？应该是2962吧。
你的载体加1ul，片段加140/C   ul。C是浓度，你估量下，自己估不准让师兄帮你估一下。
然后酶加1，10×buffer加1，补水至10.
16度过夜。
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25楼2014-08-29 11:51:37
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
luchao507(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-08-29 20:45:32
最后6000离心1分钟，不要8000吧，太大了转速。

然后还有，涂板的时候，就保留100ul的上清，其余吸出来扔掉。用着100混匀离心的菌体，涂板。
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26楼2014-08-29 11:53:37
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luchao507

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27楼2014-08-29 15:47:38
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luchao507

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28楼2014-08-29 15:49:00
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miclebibi

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

应该是连接的问题，载体和片段1:3-1:5的摩尔比
T载体连接之前用blunt enzyme处理了吗？
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29楼2014-09-01 09:14:37
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)
引用回帖:
27楼: Originally posted by luchao507 at 2014-08-29 15:47:38
16度过夜选择连接10个小时吗？有没有什么方法鉴定是否连接上？...

提质粒酶切鉴定
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30楼2014-09-01 09:25:32
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