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chenxiaojun2003至尊木虫 (著名写手)
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[交流]
看样子必须推迟毕业了，急火攻心，求助
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在论文研究中发现了很多问题，明年就该毕业了，每月一次的汇报都没有进展，老板已经达到忍耐的极限了，昨天开题又提出了一系列的问题，他的火已经上来，在这里借助小木虫请教各位，恳请对我的论文能够提出建议和指导，谢谢各位了。 我的试验思路如下：利用烟草花叶病毒的运动蛋白（30kd）可以扩大胞间连丝的孔径的特性和绿色荧光蛋白（GFP）作为报告基因的优点，构建质粒MP-GFP，并在大肠杆菌中进行原核表达，最终表达出来的包涵体形式存在，这样就难以保证运动蛋白的特性，再加上MP-GFP变性纯化后进行复性，可是复性效率没有找到合适的方法进行评价。在我的试验中发现MP-GFP纯化出后其荧光性存在，能否表明其运动性也存在？目前表达的是包涵体，能否通过改变表达其他条件得到可溶性表达（我初步试验了降低温度和IPTG的量没有达到可溶性表达）。 我构建质粒时所采用的表达载体是pET-28(b)-MP-GFP，能否改变表达载体，而得到可溶性表达，或者改变MP-GFP连接的方式，如pET-28(b)-GFP-MP，其是否可行？ 在已有的文献中，MP或GFP的研究在转基因作物中研究的很多，把外源表达的MP、GFP或MP-GFP蛋白而进入植物细胞的方法，多采用显微注射的方法而将外源性的蛋白注射进入植物叶肉细胞而研究运动蛋白的运动情况。我试验想将外源表达的蛋白MP-GFP进入烟草的叶肉细胞，是否还有其他的方法或者更好的试验方法？外源注射进入的MP-GFP性质或特性与植物内源存在的MP特性是否存在很大的差异？ |
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