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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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chenxiaojun2003

至尊木虫 (著名写手)

[交流] 看样子必须推迟毕业了,急火攻心,求助

在论文研究中发现了很多问题,明年就该毕业了,每月一次的汇报都没有进展,老板已经达到忍耐的极限了,昨天开题又提出了一系列的问题,他的火已经上来,在这里借助小木虫请教各位,恳请对我的论文能够提出建议和指导,谢谢各位了。
我的试验思路如下:利用烟草花叶病毒的运动蛋白(30kd)可以扩大胞间连丝的孔径的特性和绿色荧光蛋白(GFP)作为报告基因的优点,构建质粒MP-GFP,并在大肠杆菌中进行原核表达,最终表达出来的包涵体形式存在,这样就难以保证运动蛋白的特性,再加上MP-GFP变性纯化后进行复性,可是复性效率没有找到合适的方法进行评价。在我的试验中发现MP-GFP纯化出后其荧光性存在,能否表明其运动性也存在?目前表达的是包涵体,能否通过改变表达其他条件得到可溶性表达(我初步试验了降低温度和IPTG的量没有达到可溶性表达)。

我构建质粒时所采用的表达载体是pET-28(b)-MP-GFP,能否改变表达载体,而得到可溶性表达,或者改变MP-GFP连接的方式,如pET-28(b)-GFP-MP,其是否可行?

在已有的文献中,MP或GFP的研究在转基因作物中研究的很多,把外源表达的MP、GFP或MP-GFP蛋白而进入植物细胞的方法,多采用显微注射的方法而将外源性的蛋白注射进入植物叶肉细胞而研究运动蛋白的运动情况。我试验想将外源表达的蛋白MP-GFP进入烟草的叶肉细胞,是否还有其他的方法或者更好的试验方法?外源注射进入的MP-GFP性质或特性与植物内源存在的MP特性是否存在很大的差异?
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xxh8372

荣誉版主 (文坛精英)

小木虫微笑研究僧

同情一下,祝好运!!!
____/\~~~/\,----(..)/\____//|(\|(^\/___\/\||__||__|-"
2楼2008-04-15 22:58:02
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argnout

金虫 (小有名气)


reasonspare(金币+1,VIP+0):THANKS
为什么不直接转化植物
3楼2008-04-15 23:02:05
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winter_gates

金虫 (正式写手)

生命过客

★ ★ ★
reasonspare(金币+3,VIP+0):THANKS
可视化的一般研究方法(仅仅在我关注的领域,病毒学中)通常将病毒蛋白的基因或者cDNA(为了研究RNA在活细胞中的运动)与荧光蛋白重组构建如瞬时表达载体或者稳定表达载体中,转化入细胞,诱导表达,通过激光共聚焦显微镜或者荧光显微镜观察。
植物研究的思路是否可以借用?
For my life!
4楼2008-04-15 23:22:08
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winter_gates

金虫 (正式写手)

生命过客

另:祝好运。
For my life!
5楼2008-04-15 23:22:40
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chenxiaojun2003

至尊木虫 (著名写手)

真诚各位虫子的积极建议,请版主给前50位每位回复者分发一个金币。

真诚各位虫子的积极建议,请版主给前50位回复者每人分发一个金币。
6楼2008-04-17 17:05:22
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everbeen

木虫 (小有名气)

植物的不了解。
外源蛋白导入动物细胞,Pierce有一个Pro-Ject Protein Transfection Reagent; 也可以用Adenovirus.

祝好运。
7楼2008-04-17 18:39:04
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sofu

金虫 (正式写手)

体外表达和纯化蛋白大多是为了体外研究蛋白的结构和功能。你体外表达和GFP在一起的融合蛋白再将蛋白导入到植物体虽说理论上可行,但是要解决的问题很多。真不如将外源基因转化到植物体简单。

[ Last edited by sofu on 2008-4-18 at 14:44 ]
"An expert is a man who has made all the mistakes which can be made, in a very narrow field." -- Niels Henrik David Bohr
8楼2008-04-18 14:39:20
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hfztim

至尊木虫 (正式写手)

1.可采用酵母对MP进行分泌表达。
2.也可选择一植物表达载体,通过农杆菌等方法转到烟草的叶片中。
9楼2008-04-18 17:48:00
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honinglee

木虫 (正式写手)

也建议直接用农杆菌质粒T-DNA直接转化是不是成功率更高些
天下事有难易乎?为之,则难者亦易矣;不为,则易者亦难矣。
10楼2008-04-18 18:53:49
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