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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 用鉴定真菌的通用引物its1、its4，为何扩出目的条带呢
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yuren2009

木虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by zans2009 at 2014-08-27 19:32:01
因为只知道是某种真菌，但不知道是哪种真菌，如果更换引物的话，前辈建议用哪种引物呢？...

建议你重新提一下DNA和PCR，还是如此的话，可以考虑ITS其它引物。
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学习使你立于不败之地
11楼2014-08-27 23:26:32
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hihe99

银虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by zans2009 at 2014-08-27 20:39:31
因为是第一次做这方面的工作，有些还不是很明白。
电泳出现无单一的条带，不知道是否是因为没有纯化好。
在真菌鉴定中，用ITS做PCR出现5kb的非特异条带的情况普遍吗？貌似文献中没有提及非特异条带的问题。...

我做过个1600的，是正确的，也有报道，你的5000也可能是正确的，仅供参考
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12楼2014-08-28 13:47:00
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zans2009

铜虫 (初入文坛)
稀释了20倍，3、4号问题依旧啊
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13楼2014-08-28 21:19:56
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lesley1139

银虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by zans2009 at 2014-08-27 11:46:22
我筛出4种真菌，做PCR是打算胶回收后测序做鉴定的，用its通用引物P出真菌的its2序列应该是500bp左右吧。现在3、4号出现5kb的条带，而且500bp处的条带不如1、2号那么明显，心里没谱了...

求问楼主，扩增产物如何推算的
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14楼2016-10-19 16:03:47
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宋娜songna

新虫 (初入文坛)
你用95度10min试一试
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15楼2018-08-15 09:47:43
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lucifer晗

铜虫 (初入文坛)
楼主，请问您是如何提的基因组DNA呢，我是做酵母的，但用试剂盒提出的基因组DNA只有几ng。是不是菌种不同所以提出来的浓度差很多？
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16楼2020-01-07 21:47:25
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