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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 藻细胞破碎
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hnsea

铜虫 (小有名气)

[求助] 藻细胞破碎 已有3人参与

培养好的藻细胞要提取基因组，关于细胞破碎有两个问题：
第一就是利用液氮研磨的话，但藻细胞含有一定的培养液，需要洗涤干净吧用超纯水洗是否可行？然后的步骤放-20度冰箱，再拿出来加液氮研磨吗？藻细胞外有一定的水分，那岂不是不能研磨成粉末，而是一团的东西？
第二就是不用液氮，直接在冰上，用研钵将其捣碎？
还有其他比较好的方法吗？
金币不多，请指导 的虫虫海涵。
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当我哭泣我没有好看的鞋子时， 却发现有人连脚都没有。
1楼 2014-08-27 01:02:27
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zff922

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-12-04 19:55:58
我认为我们实验室的最简单，就是加入0.1g的玻璃珠进行震荡破碎，离心取上清就行了。玻璃珠是0.42mm直径的。震荡10s冰置1min，重复3次后放冰上10min，然后进行后续实验，以后都在室温下进行了。
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每天都充实，有意义。
4楼2014-12-03 14:01:33
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huyan0817

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
hnsea: 金币+2, ★★★★★最佳答案 2014-08-27 14:17:22
hnsea: 金币+1 2014-08-27 14:24:55
最好的方法是买点试剂盒,效果非常好!省时省力!用液氮破碎也可以,最好先离心收集细胞,直接加液氮效果非常不错! 不用液氮的话就直接反复多次冻融,不过效果没有用液氮的好!
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忧伤说笑
2楼2014-08-27 13:08:07
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johnkm66

新虫 (初入文坛)
★
感谢参与，应助指数 +1
hnsea: 金币+1, ★★★很有帮助 2014-08-27 14:25:59
本帖内容被屏蔽
3楼2014-08-27 13:09:15
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zff922

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
hnsea: 金币+1, ★★★★★最佳答案, 剩下的币少，再追加。感谢。 2014-12-03 14:44:21
特别是鉴定纯合体的时候，最为方便，因为藻类的菌落PCR往往条带不专一，所以也需要相对纯的DNA进行鉴定，但是只是鉴定的话，太纯的DNA抽取也浪费时间。所以我都是直接用水把离心的藻悬浮至100微升，加一点玻璃珠，震荡3次后直接离心去0.2微升的上清做PCR。效果很好，和纯的DNA没有区别。缺点就是只是鉴定用，然后就直接扔掉了。优点是，藻的用量少，操作简单，效果好。
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hnsea
每天都充实，有意义。
5楼2014-12-03 14:08:26
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