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hnsea

铜虫 (小有名气)

[求助] 藻细胞破碎 已有3人参与

培养好的藻细胞要提取基因组,关于细胞破碎有两个问题:
第一就是利用液氮研磨的话,但藻细胞含有一定的培养液,需要洗涤干净吧用超纯水洗是否可行?然后的步骤放-20度冰箱,再拿出来加液氮研磨吗?藻细胞外有一定的水分,那岂不是不能研磨成粉末,而是一团的东西?
第二就是不用液氮,直接在冰上,用研钵将其捣碎?
还有其他比较好的方法吗?
金币不多,请指导 的虫虫海涵。
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当我哭泣我没有好看的鞋子时, 却发现有人连脚都没有。
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zff922

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-12-04 19:55:58
我认为我们实验室的最简单,就是加入0.1g的玻璃珠进行震荡破碎,离心取上清就行了。玻璃珠是0.42mm直径的。震荡10s冰置1min,重复3次后放冰上10min,然后进行后续实验,以后都在室温下进行了。
每天都充实,有意义。
4楼2014-12-03 14:01:33
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huyan0817

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
hnsea: 金币+2, ★★★★★最佳答案 2014-08-27 14:17:22
hnsea: 金币+1 2014-08-27 14:24:55
最好的方法是买点试剂盒,效果非常好!省时省力!用液氮破碎也可以,最好先离心收集细胞,直接加液氮效果非常不错! 不用液氮的话就直接反复多次冻融,不过效果没有用液氮的好!

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2楼2014-08-27 13:08:07
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johnkm66

新虫 (初入文坛)

★
感谢参与,应助指数 +1
hnsea: 金币+1, ★★★很有帮助 2014-08-27 14:25:59
本帖内容被屏蔽

3楼2014-08-27 13:09:15
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zff922

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
hnsea: 金币+1, ★★★★★最佳答案, 剩下的币少,再追加。感谢。 2014-12-03 14:44:21
特别是鉴定纯合体的时候,最为方便,因为藻类的菌落PCR往往条带不专一,所以也需要相对纯的DNA进行鉴定,但是只是鉴定的话,太纯的DNA抽取也浪费时间。所以我都是直接用水把离心的藻悬浮至100微升,加一点玻璃珠,震荡3次后直接离心去0.2微升的上清做PCR。效果很好,和纯的DNA没有区别。缺点就是只是鉴定用,然后就直接扔掉了。优点是,藻的用量少,操作简单,效果好。

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每天都充实,有意义。
5楼2014-12-03 14:08:26
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