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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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liyan1132

铁虫 (小有名气)

[求助] 蛋白质变性 已有2人参与

我现在要做蛋白变性实验,查了下资料发现可以加入很多东西都可以使蛋白变性,强酸,强碱,尿素,SDS,巯基乙醇等。但是好像是加入强酸,强碱,尿素,SDS,最后都要透析才能终止反应,我想要的是加入一种不会引入杂质的物质,使得蛋白质可以变性,而且不会沉淀,关键是还要能随时终止变性。我现在想到的是加入巯基乙醇,它会挥发的。但是不知道加入量应该为多少。而且具体的实验操作我也不太清楚。希望大家可以指点 !谢谢!
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生化体外诊断试剂研发,期待大家一起交流!
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帖航

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
巯基乙醇只能断裂二硫键,你想要完全变性蛋白只用巯基乙醇是不行的,强酸强碱一般是不可逆的,尿素、盐酸胍、SDS和巯基乙醇是可逆的,透析不是终止反应,而是复性过程,稀释或者透析可以将变性的蛋白复性。一般变性蛋白使用6-8M尿素(一般8M),6-8M盐酸胍(一般6M),当蛋白存在二硫键时才用巯基乙醇(50-100mM)或者DTT(1-10mM)。SDS 10%即可。
2楼2014-08-28 11:10:50
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赵鑫易

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

加入强酸,然后用强碱中和
3楼2015-03-16 14:04:13
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