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liyan1132

铁虫 (小有名气)

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注册: 2011-08-30
性别: MM
专业: 生物化学

[求助] 蛋白质变性已有2人参与

我现在要做蛋白变性实验，查了下资料发现可以加入很多东西都可以使蛋白变性，强酸，强碱，尿素，SDS，巯基乙醇等。但是好像是加入强酸，强碱，尿素，SDS，最后都要透析才能终止反应，我想要的是加入一种不会引入杂质的物质，使得蛋白质可以变性，而且不会沉淀，关键是还要能随时终止变性。我现在想到的是加入巯基乙醇，它会挥发的。但是不知道加入量应该为多少。而且具体的实验操作我也不太清楚。希望大家可以指点 !谢谢！

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生化体外诊断试剂研发，期待大家一起交流！

1楼 2014-08-26 11:07:54

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

帖航

银虫 (小有名气)

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专业: 细胞生物学研究中的新方法

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

巯基乙醇只能断裂二硫键，你想要完全变性蛋白只用巯基乙醇是不行的，强酸强碱一般是不可逆的，尿素、盐酸胍、SDS和巯基乙醇是可逆的，透析不是终止反应，而是复性过程，稀释或者透析可以将变性的蛋白复性。一般变性蛋白使用6-8M尿素（一般8M），6-8M盐酸胍（一般6M），当蛋白存在二硫键时才用巯基乙醇（50-100mM）或者DTT（1-10mM）。SDS 10%即可。