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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 组氨酸结合镍柱问题
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璧月

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9楼: Originally posted by 1020490511 at 2014-09-04 10:49:09
问一下楼主，你用的A液和B液分别是什么？我的重组his标签蛋白挂不上柱子，不知原因。谢谢！

我们这里也遇到过不挂柱的问题，不过拿出菌种重新做又好了，估计是因为菌种退化。
菌种退化不止是有不挂柱的情况，还会出现蛋白没活性的情况，这些还需要注意。
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11楼2014-09-04 12:23:37
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璧月

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5楼: Originally posted by flll2014 at 2014-09-02 20:52:48
纯化标签和目的蛋白之间本来就有酶切位点，我是直接拿酶去切his标签的，切完之后，重新挂柱，正常的应该是标签挂柱，目的蛋白流穿，但是现在的情况是标签和蛋白都结合在柱子上了。用高浓度咪唑洗脱后既有标签又有目 ...

既然目的蛋白没有流穿，那就低浓度洗目的蛋白，高浓度洗标签呗
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12楼2014-09-04 12:30:25
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flll2014

铜虫 (小有名气)
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11楼: Originally posted by 璧月 at 2014-09-04 12:23:37
我们这里也遇到过不挂柱的问题，不过拿出菌种重新做又好了，估计是因为菌种退化。
菌种退化不止是有不挂柱的情况，还会出现蛋白没活性的情况，这些还需要注意。...

菌种退化什么意思
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13楼2014-09-04 13:05:32
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flll2014

铜虫 (小有名气)
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12楼: Originally posted by 璧月 at 2014-09-04 12:30:25
既然目的蛋白没有流穿，那就低浓度洗目的蛋白，高浓度洗标签呗...

嗯，是的，正打算试试呢
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14楼2014-09-04 13:07:04
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璧月

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13楼: Originally posted by flll2014 at 2014-09-04 13:05:32
菌种退化什么意思...

发生变异，原来需要的特性消失了呗

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15楼2014-09-04 22:53:21
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璧月

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13楼: Originally posted by flll2014 at 2014-09-04 13:05:32
菌种退化什么意思...

保菌种，保质粒，就不需要重新从头做了呀

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16楼2014-09-04 22:56:53
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1020490511

银虫 (小有名气)
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11楼: Originally posted by 璧月 at 2014-09-04 12:23:37
我们这里也遇到过不挂柱的问题，不过拿出菌种重新做又好了，估计是因为菌种退化。
菌种退化不止是有不挂柱的情况，还会出现蛋白没活性的情况，这些还需要注意。...

已经做测序了，测序正确。应该不会退化吧？表达的蛋白应该有活性吧？

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17楼2014-09-05 09:41:35
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