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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » PCR扩出多条带
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bomeijuan

银虫 (小有名气)

[交流] PCR扩出多条带

我提取微生物总DNA，经过IpCR 扩增16S rRNA以后，跑了电泳，本来正确结果应该是230bp左右一条很清晰的条带的，结果我的样品出来很多条带，最下面的引物二聚体很亮，都在100bp以下，目的条带若有若无，还有其他很多的非特异扩增，marker是100bp的。请问大家是什么原因，怎么改正？


[ Last edited by bomeijuan on 2008-4-14 at 21:10 ]
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1楼 2008-04-14 20:55:15
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jinger_qd

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by annwt at 2008-4-15 06:58:
从图上看是非特异扩增，引物如果没有问题，就是PCR条件有问题，仔细检查PCR仪的条件设置，或提高温度。

同意！引物二聚体那么亮，应该减少引物的量。而且如果做鉴定的话，16s最好扩的长一点吧！
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16楼2008-04-17 18:37:37
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xiukuncui

木虫 (正式写手)
★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):新虫,奖励一下
PCR特异性不高，建议提高一下温度，或者再加10%甲酰胺试一试
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2楼2008-04-14 21:05:13
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bomeijuan

银虫 (小有名气)
我加了4%的DMSO的
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3楼2008-04-14 21:11:22
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huang1962

银虫 (小有名气)
★
reasonspare(金币+1,VIP+0):谢谢分享,欢迎常来
做個溫度梯度試試。
赞一下(10人) 回复此楼
4楼2008-04-14 22:43:48
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