24小时热门版块排行榜    

查看: 1033  |  回复: 8
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

lybio

金虫 (正式写手)

[交流] 急!单酶切为何出现多条带?

用EcorIII进行单酶切重组质粒(确定只有一个此酶切位点,而且质粒用其他酶切,得到对的相应条带),反应体系10ul:酶0.5ul,质粒3ul,buffer 1ul,灭菌DD水 5.5ul ,37度过夜酶切,结果电泳出现4个条带,其中有一条只有400bp,而且条带很宽,不解是什么原因?希望得到大家的帮助,谢谢!
回复此楼

» 猜你喜欢

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lybio

金虫 (正式写手)

EcorIII酶切位点是我特意通过重叠延伸PCR得到的酶切位点,可保证基因中没有这个酶切位点,且连接的是T simple 载体,没有其他酶切位点。昨天又做了此酶切,酶量加大到0.8ul,质粒3ul,还是出现多条带,纳闷。决定先去测个序看看
7楼2008-04-15 13:54:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

pph0259

木虫 (正式写手)

★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):谢谢分享,欢迎常来
质粒不纯的可能性较大;
2楼2008-04-13 22:20:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lybio

金虫 (正式写手)

用试剂盒提的 ,应该纯度可以保证,而且用双酶切条带正确
3楼2008-04-14 17:56:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lingyu20071001

银虫 (小有名气)


reasonspare(金币+1,VIP+0):谢谢分享,欢迎常来
可能没有完全切开,建议加1ul酶试试
4楼2008-04-14 19:07:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 面上模板改不了页边距吧? +5 ieewxg 2026-02-25 6/300 2026-03-01 00:10 by addressing
[考研] 307求调剂 +4 73372112 2026-02-28 6/300 2026-03-01 00:04 by ll247
[考研] 304求调剂 +3 52hz~~ 2026-02-28 5/250 2026-03-01 00:00 by 52hz~~
[考研] 317一志愿华南理工电气工程求调剂 +5 Soliloquy_Q 2026-02-28 8/400 2026-02-28 23:36 by xyx2012xyx
[考研] 化工专硕348,一志愿985求调剂 +4 弗格个 2026-02-28 6/300 2026-02-28 22:00 by wang_dand
[考研] 292求调剂 +3 yhk_819 2026-02-28 3/150 2026-02-28 21:57 by gaoxiaoniuma
[考研] 290求调剂 +5 材料专硕调剂; 2026-02-28 6/300 2026-02-28 21:40 by gaoxiaoniuma
[考研] 295求调剂 +5 19171856320 2026-02-28 5/250 2026-02-28 21:39 by gaoxiaoniuma
[考博] 26申博 +4 想申博! 2026-02-26 4/200 2026-02-28 21:37 by limorning
[考研] 材料学调剂 +5 提神豆沙包 2026-02-28 5/250 2026-02-28 21:34 by gaoxiaoniuma
[考研] 298求调剂 +8 人间唯你是清欢 2026-02-28 11/550 2026-02-28 20:26 by L135790
[考研] 276求调剂 +3 路lyh123 2026-02-28 4/200 2026-02-28 19:45 by 路lyh123
[考研] 0856材料求调剂 +10 hyf hyf hyf 2026-02-28 11/550 2026-02-28 18:50 by 无际的草原
[考研] 285求调剂 +5 满头大汗的学生 2026-02-28 5/250 2026-02-28 18:10 by 材料专硕调剂;
[考博] 博士自荐 +3 kkluvs 2026-02-28 3/150 2026-02-28 16:59 by StarAura
[高分子] 求环氧树脂研发1名 +3 孙xc 2026-02-25 11/550 2026-02-28 16:57 by ichall
[考研] 0856调剂 +3 刘梦微 2026-02-28 3/150 2026-02-28 13:22 by houyaoxu
[硕博家园] 博士自荐 +6 科研狗111 2026-02-26 9/450 2026-02-28 12:32 by seaskyy
[考研] 272求调剂 +3 田智友 2026-02-28 3/150 2026-02-28 12:31 by 王加浩to
[考研] 298求调剂 +4 axyz3 2026-02-28 4/200 2026-02-28 11:21 by wang_dand
信息提示
请填处理意见