24小时热门版块排行榜    

查看: 991  |  回复: 8
当前主题已经存档。

lybio

金虫 (正式写手)

[交流] 急!单酶切为何出现多条带?

用EcorIII进行单酶切重组质粒(确定只有一个此酶切位点,而且质粒用其他酶切,得到对的相应条带),反应体系10ul:酶0.5ul,质粒3ul,buffer 1ul,灭菌DD水 5.5ul ,37度过夜酶切,结果电泳出现4个条带,其中有一条只有400bp,而且条带很宽,不解是什么原因?希望得到大家的帮助,谢谢!
回复此楼

» 猜你喜欢

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pph0259

木虫 (正式写手)

★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):谢谢分享,欢迎常来
质粒不纯的可能性较大;
2楼2008-04-13 22:20:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lybio

金虫 (正式写手)

用试剂盒提的 ,应该纯度可以保证,而且用双酶切条带正确
3楼2008-04-14 17:56:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lingyu20071001

银虫 (小有名气)


reasonspare(金币+1,VIP+0):谢谢分享,欢迎常来
可能没有完全切开,建议加1ul酶试试
4楼2008-04-14 19:07:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xxh8372

荣誉版主 (文坛精英)

小木虫微笑研究僧

★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):谢谢分享,欢迎常来
这个应该是外源片断含有这个酶的酶切位点

当然具体也不是很好分析,强烈建议上一个图

另外还没有介绍外缘片断的大小,等等
____/\~~~/\,----(..)/\____//|(\|(^\/___\/\||__||__|-"
5楼2008-04-14 20:14:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

十比

木虫 (著名写手)


reasonspare(金币+1,VIP+0):谢谢分享,欢迎常来
没有完全切开,建议减少质粒的量,应该一微升就行啦。
6楼2008-04-14 23:14:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lybio

金虫 (正式写手)

EcorIII酶切位点是我特意通过重叠延伸PCR得到的酶切位点,可保证基因中没有这个酶切位点,且连接的是T simple 载体,没有其他酶切位点。昨天又做了此酶切,酶量加大到0.8ul,质粒3ul,还是出现多条带,纳闷。决定先去测个序看看
7楼2008-04-15 13:54:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lybio

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by 十比 at 2008-4-14 23:14:
没有完全切开,建议减少质粒的量,应该一微升就行啦。

1ul 会不会太少了,根本见不着条带
8楼2008-04-15 13:56:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lybio

金虫 (正式写手)

是质粒太浓了,用量少点的话,就没问题了
9楼2008-05-20 12:21:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 lybio 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
信息提示
请填处理意见