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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 请教：转化平板不长菌落
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逸风

金虫 (小有名气)

[交流] 请教：转化平板不长菌落

连接所用目的基因和载体片段都已酶切好，胶回收。
通过marker比对，计算两者连接计量
按照Takara T4连接酶25ul体系加反应成分
但板上只有气泡，没有菌落
请教是什么原因？？？？
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1楼 2008-04-13 09:20:49
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yellow.

引用回帖:
Originally posted by wuhuifang909 at 2008-4-13 16:52:
我现在也遇到同样的问题，就是不长菌落！和楼主交流下，你做感受态时加卡那霉素了吗？我加了之后没长起来，不知道什么原因。

做感受态的菌株没有任何抗性的，成功转入质粒后，质粒上的抗性基因赋予菌体相应的抗性，这是利用抗性筛选阳性转化子的一个原理。
做感受态细胞时就加抗生素，没长起来还好，要是能长起来，那你就麻烦了！
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8楼2008-04-14 09:35:57
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wwfifa

铜虫 (小有名气)
目的基因与载体片段是否已连接，把问题写详尽点吧
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2楼2008-04-13 10:02:56
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yellow.

★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):谢谢分享,欢迎常来
一点一点排查吧，
有没有做空质粒转化对照，检测一下感受态是否有问题
排除感受态的问题后，就可能是你连接不成功了
用错抗生素或者量加的太多，这个状况应该不会出现吧
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3楼2008-04-13 10:54:40
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long0553299

★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):谢谢分享,欢迎常来
你用的是什么突宿主菌?
通常做表达时,先将连接产物转化至DH5a,这样可提高转化率.
我认为你的感受态可以不好使,转个空载体进去看看
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4楼2008-04-13 11:52:45
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