应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 请教：转化平板不长菌落
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
81/1返回列表
查看: 859  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

逸风

金虫 (小有名气)

[交流] 请教：转化平板不长菌落

连接所用目的基因和载体片段都已酶切好，胶回收。
通过marker比对，计算两者连接计量
按照Takara T4连接酶25ul体系加反应成分
但板上只有气泡，没有菌落
请教是什么原因？？？？
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2008-04-13 09:20:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wwfifa

铜虫 (小有名气)
目的基因与载体片段是否已连接，把问题写详尽点吧
赞一下 回复此楼
2楼2008-04-13 10:02:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yellow.

★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):谢谢分享,欢迎常来
一点一点排查吧，
有没有做空质粒转化对照，检测一下感受态是否有问题
排除感受态的问题后，就可能是你连接不成功了
用错抗生素或者量加的太多，这个状况应该不会出现吧
赞一下(10人) 回复此楼
3楼2008-04-13 10:54:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

long0553299

★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):谢谢分享,欢迎常来
你用的是什么突宿主菌?
通常做表达时,先将连接产物转化至DH5a,这样可提高转化率.
我认为你的感受态可以不好使,转个空载体进去看看
赞一下(10人) 回复此楼
4楼2008-04-13 11:52:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wuhuifang909

金虫 (初入文坛)
我现在也遇到同样的问题，就是不长菌落！和楼主交流下，你做感受态时加卡那霉素了吗？我加了之后没长起来，不知道什么原因。
赞一下 回复此楼
5楼2008-04-13 16:52:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mklpumc

木虫 (小有名气)
★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):谢谢分享,欢迎常来
连接时用１０ul体系，１６度２４小时后，全部加入到感受态细菌中转化，应该就能做出来的！
赞一下(10人) 回复此楼
6楼2008-04-13 20:53:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wjswj

木虫 (正式写手)

小木虫领金币专业户
步骤不够详细，通常做感受态都不加抗生素。还是按照严格的是严要求把该做的对照都做齐了然后再确定什么原因吧。
赞一下 回复此楼
金币是赌出来的
7楼2008-04-14 08:35:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yellow.

引用回帖:
Originally posted by wuhuifang909 at 2008-4-13 16:52:
我现在也遇到同样的问题，就是不长菌落！和楼主交流下，你做感受态时加卡那霉素了吗？我加了之后没长起来，不知道什么原因。

做感受态的菌株没有任何抗性的，成功转入质粒后，质粒上的抗性基因赋予菌体相应的抗性，这是利用抗性筛选阳性转化子的一个原理。
做感受态细胞时就加抗生素，没长起来还好，要是能长起来，那你就麻烦了！
赞一下 回复此楼
8楼2008-04-14 09:35:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 逸风 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 321求调剂 +7 璞玉~~ 2026-03-25 8/400 2026-03-29 06:41 by 544594351
[考研] 348求调剂 +3 小懒虫不懒了 2026-03-28 3/150 2026-03-29 00:39 by 544594351
[考研] 材料学硕333求调剂 +10 北道巷 2026-03-24 10/500 2026-03-28 23:06 by 无际的草原
[考研] 学硕274求调剂 +9 Li李鱼 2026-03-26 9/450 2026-03-28 21:42 by bymhappy
[考研] 312，生物学求调剂 +3 小译同学abc 2026-03-28 3/150 2026-03-28 15:32 by 落睿可思
[考研] 材料与化工考研调剂 +17 孅華 2026-03-22 17/850 2026-03-28 08:35 by WYUMater
[材料工程] 一志愿C9材料与化工专业总分300求调剂 +8 曼111 2026-03-24 9/450 2026-03-28 07:58 by YYYYX1234
[考研] 265求调剂11408 +3 刘小鹿lu 2026-03-27 3/150 2026-03-27 20:53 by nihaoar
[考研] 考研化学308分求调剂 +10 你好明天你好 2026-03-23 12/600 2026-03-27 14:43 by shangxh
[考研] 0703化学一志愿南京师范大学303求调剂 +3 zzffylgg 2026-03-24 3/150 2026-03-27 10:42 by shangxh
[考研] 351求调剂 +4 麦克阿磊 2026-03-24 4/200 2026-03-27 00:32 by wxiongid
[考研] 321求调剂 +6 wasdssaa 2026-03-26 6/300 2026-03-26 20:57 by sanrepian
[考研] 327求调剂 +7 prayer13 2026-03-23 7/350 2026-03-26 20:48 by 不吃魚的貓
[考研] 0703化学求调剂 +3 丹青奶盖 2026-03-26 5/250 2026-03-26 20:11 by macy2011
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +3 崔wj 2026-03-26 3/150 2026-03-26 19:57 by nihaoar
[考研] 考研一志愿苏州大学初始315（英一）求调剂 +3 sbdksD 2026-03-24 4/200 2026-03-25 18:16 by xcjcqu
[考研] 080500求调剂 +3 zzzzfan 2026-03-24 3/150 2026-03-24 16:38 by barlinike
[考研] 求调剂一志愿武汉理工大学材料工程（085601） +5 WW.' 2026-03-23 7/350 2026-03-24 14:50 by sprinining
[考研] 一志愿山东大学药学学硕求调剂 +3 开开心心没烦恼 2026-03-23 4/200 2026-03-24 00:06 by 开开心心没烦恼
[考研] 361求调剂 +3 Glack 2026-03-22 3/150 2026-03-23 22:03 by fuyu_
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭