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兔BMSC的提取 已有1人参与
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我最近一直在取兔子的骨髓，分离培养骨髓间充质干细胞，但试了好几次，结果总是不理想。全骨髓贴壁和ficoll密度梯度离心法都试过，48小时首次全量换液，以后3天换液，10%FBS+L-DMEM培养，结果，只能在48小时左右看到少量的贴壁细胞，压根儿就不能形成克隆，不知道问题到底出现在哪里。我自己估计可能有一下几方面的问题。 1，兔子的年龄问题。我用的是大约3Kg左右的兔子，在两侧髂脊处，各取5ml左右的骨髓，不知是不是兔子年龄太大，应该换一个小点的兔子？我看有人说用幼兔，那是多大的？ 2，首次换液时间问题。对这个首次换液时间，也是一个很有争议的问题，不过多半建议是首次换液时间尽可能长点，是不是72小时，半量换液会好点？ 3，全骨髓贴壁法时，红细胞太多了，培养皿底部直接形成了一层血膜，这是不是直接就影响BMSC贴壁了，不知各位前辈在用此方法时，是如何处理这个问题的？ 4，血清浓度问题。难道是10%血清浓度太低了，不太可能吧？ 请各位经验丰富的前辈指导下，都快被逼疯了，多谢了！ |
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