24小时热门版块排行榜

返回列表

liukuantj

铁虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 11
帖子: 11
在线: 2.6小时
虫号: 3155082
注册: 2014-04-22
专业: 骨、关节、软组织损伤与修

[求助] 兔BMSC的提取已有1人参与

我最近一直在取兔子的骨髓，分离培养骨髓间充质干细胞，但试了好几次，结果总是不理想。全骨髓贴壁和ficoll密度梯度离心法都试过，48小时首次全量换液，以后3天换液，10%FBS+L-DMEM培养，结果，只能在48小时左右看到少量的贴壁细胞，压根儿就不能形成克隆，不知道问题到底出现在哪里。我自己估计可能有一下几方面的问题。
1，兔子的年龄问题。我用的是大约3Kg左右的兔子，在两侧髂脊处，各取5ml左右的骨髓，不知是不是兔子年龄太大，应该换一个小点的兔子？我看有人说用幼兔，那是多大的？
2，首次换液时间问题。对这个首次换液时间，也是一个很有争议的问题，不过多半建议是首次换液时间尽可能长点，是不是72小时，半量换液会好点？
3，全骨髓贴壁法时，红细胞太多了，培养皿底部直接形成了一层血膜，这是不是直接就影响BMSC贴壁了，不知各位前辈在用此方法时，是如何处理这个问题的？
4，血清浓度问题。难道是10%血清浓度太低了，不太可能吧？
请各位经验丰富的前辈指导下，都快被逼疯了，多谢了！

回复此楼