应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 连接转化
51/1返回列表
查看: 996  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

落木潇潇sky

铁虫 (初入文坛)

[求助] 连接转化 已有4人参与

lz本科实验菜鸟一枚，现在在做茶花的its。现在遇到问题，所有的程序都按照说明书操作的，连接试剂是TAKARA的，生工的提取试剂盒，胶回收试剂盒，菌用的是DH5α。可是最后AMP上就是不长菌，感受态涂LB是长菌的。怀疑连接转化有问题，可是无从下手，求指教！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
一条实验狗
1楼 2014-08-17 09:57:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Lylissa

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
落木潇潇sky(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-08-17 20:31:50
你所连接的重组质粒是否是抗氨苄AMP的，氨苄与LB培养基的比例一般为1：:1000，另外可能与你连接所用的酶切载体和片段浓度有关，酶切2ng的载体和1ng的片段后，在10ul的连接体系里，加2ul酶切载体和6ul酶切片段试试，另外做个空白对照吧，就是加2ul酶切载体和6ul ddH2O作为空白连接。    T4 DNA连接酶的话，连接4~6h就可以连上了，转化的时候避免反复用枪头吹打DH5α.
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2014-08-17 16:07:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答

ncuduhan

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
落木潇潇sky: 金币+1, ★有帮助 2014-08-28 09:58:06
说明连接的问题咯，你是连接到什么质粒上的？T-easy吗？还是其他的质粒？
赞一下 回复此楼
2楼2014-08-17 11:14:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yang_g_g

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
落木潇潇sky(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-08-17 20:31:36
连接时测一下产物含量，连接试剂盒换个新（反复冻融影响大），另外注意amp用量，可用实验室阳性菌作对照，看看长不长。
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2014-08-17 12:39:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangranjun

荣誉版主 (知名作家)

广庭之惘然

优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
怀疑是连接问题的话可以做一个对照，可以将没有经过酶切的载体做转化涂板看看是否能长出单克隆，若能长出来可能是连接出问题，可以适当延长连接时间或更换酶切位点，若不能长出单克隆说明载体有问题喽！
赞一下(1人) 回复此楼
他日扬翼九万里，历大千世界，定我红尘心！
4楼2014-08-17 15:12:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 化学工程085602 305分求调剂 +10 RichLi_ 2026-03-25 10/500 2026-03-26 02:17 by BruceLiu320
[考研] 0854AI CV方向招收调剂 +4 章小鱼567 2026-03-23 4/200 2026-03-25 17:04 by CoderLoser
[考研] 材料与化工考研调剂 +9 孅華 2026-03-22 9/450 2026-03-25 13:09 by cmz0325
[考研] 271求调剂 +4 生如夏花… 2026-03-22 4/200 2026-03-25 11:25 by userper
[考研] 299求调剂 +7 shxchem 2026-03-20 9/450 2026-03-25 10:41 by lbsjt
[考研] 求调剂 一志愿 本科 北科大 化学 343 +4 13831862839 2026-03-24 5/250 2026-03-25 09:47 by 无际的草原
[考研] 07化学280分求调剂 +7 722865 2026-03-23 7/350 2026-03-25 09:29 by aa331100
[考研] 化学调剂 +6 yzysaa 2026-03-21 6/300 2026-03-25 09:27 by aa331100
[考研] 求调剂，一志愿:南京航空航天大学大学 ，080500材料科学与工程学硕，总分289分 +6 @taotao 2026-03-19 6/300 2026-03-25 08:37 by 木托莫露露
[考研] 上海电力大学材料防护与新材料重点实验室招收调剂研究生（材料、化学、电化学，环境） +4 我爱学电池 2026-03-23 4/200 2026-03-25 00:59 by 1027_324
[考研] 321求调剂 +4 Ymlll 2026-03-24 4/200 2026-03-24 14:44 by sprinining
[考研] 279分求调剂 一志愿211 +18 chaojifeixia 2026-03-19 20/1000 2026-03-24 10:34 by dolphin_ycj
[考研] 311求调剂 +3 26研0 2026-03-20 3/150 2026-03-22 14:46 by ColorlessPI
[考研] 生物学调剂 +5 Surekei 2026-03-21 5/250 2026-03-22 14:39 by tcx007
[考研] 求调剂 +4 要好好无聊 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:57 by 学员8dgXkO
[考研] 求助 +5 梦里的无言 2026-03-21 6/300 2026-03-21 17:51 by 学员8dgXkO
[考研] 一志愿苏州大学材料求调剂，总分315（英一） +5 sbdksD 2026-03-19 5/250 2026-03-20 22:10 by luoyongfeng
[考研] 中南大学化学学硕337求调剂 +3 niko- 2026-03-19 6/300 2026-03-20 21:58 by luoyongfeng
[考研] 求调剂一志愿南京航空航天大学289分 +3 @taotao 2026-03-19 3/150 2026-03-20 21:34 by JourneyLucky
[考研] 295复试调剂 +8 简木ChuFront 2026-03-19 8/400 2026-03-20 20:44 by zhukairuo
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭