应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » western小白求助-内参相关
51/1返回列表
查看: 2842  |  回复: 13
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

仲尼

新虫 (小有名气)

[求助] western小白求助-内参相关 已有4人参与

本人第一次做western，还在摸索中，希望有经验的虫友帮忙：
关于内参的使用方法（本人可以查到的）如下，选哪种方法更合理和保险呢，希望大神帮忙。
①同时跑两个胶，一个转膜后，用来孵育目标蛋白抗体；另一个转膜后，用来孵育内参抗体。
②跑一个胶，转膜后，先孵育目标蛋白抗体。然后，直接孵育内参抗体。
③现在有专门的抗体去除液，可以实现用同一个膜：孵育完目标蛋白抗体，并显色；用去除液去除抗体，再孵育内参抗体，显色。

注：我的目标蛋白是一种细胞膜蛋白，分子量有好多个27,43,47,67,55,117KDa；内参用的是GAPDH（37KDa）

另外，我想定性我的目标蛋白，这需要在转完膜后将膜染色，然后跟蛋白Marker对比吗？还是到发光那一步，目标条带和Marker都会跑到X光片上？
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

蛋白质生物学实验经验

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-08-16 18:19:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zero19871029

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 仲尼 at 2014-08-18 14:50:34
这样的话，我的膜是不是得剪成3部分，因为有大于内参和小于内参的目的蛋白...

是的~
回复此楼
8楼2014-08-18 17:30:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 14 个回答

仲尼

新虫 (小有名气)
没人理我，自己顶一下自己
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2014-08-18 08:28:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zero19871029

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
仲尼: 金币+2, ★★★很有帮助 2014-08-18 14:47:31
跑一个胶，转一个膜，转膜后根据内参的大小把相应的膜剪下来，根据你说的情况你的目的蛋白跟GADPH是能够分开的~
赞一下 回复此楼
3楼2014-08-18 11:28:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

景宿

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
仲尼: 金币+2, ★★★很有帮助 2014-08-18 14:47:39
可以先敷目的蛋白，然后使用洗脱液洗去之后再孵育内参，因为一般内参都是比较容易出的，所以可以后敷
赞一下 回复此楼
4楼2014-08-18 14:28:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 14 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[找工作] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 YXM1FDCSE8Bn 2026-11-01 6/300 2026-11-02 10:02 by dcc2yOIRGGTT
[公派出国] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 YXM1FDCSE8Bn 2026-11-01 6/300 2026-11-02 09:57 by dcc2yOIRGGTT
[找工作] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 YXM1FDCSE8Bn 2026-10-31 5/250 2026-11-02 09:42 by dcc2yOIRGGTT
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 YXM1FDCSE8Bn 2026-10-31 6/300 2026-11-02 09:36 by dcc2yOIRGGTT
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 hKe7U1kad5Sg 2026-10-31 7/350 2026-11-02 09:29 by dcc2yOIRGGTT
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 hKe7U1kad5Sg 2026-10-31 7/350 2026-11-02 09:29 by dcc2yOIRGGTT
[基金申请] 各位基础老师们，看完中央《从严治党》的决定后，对学术界更加有信心了吧 +3 iaeyuan 2026-11-01 3/150 2026-11-02 07:49 by kudofaye
[硕博家园] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 hKe7U1kad5Sg 2026-10-31 7/350 2026-11-02 06:29 by xzcv0Tehd8lQ
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 xvJS1BYDxvBS 2026-10-31 8/400 2026-11-02 06:13 by xzcv0Tehd8lQ
[论文投稿] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 xvJS1BYDxvBS 2026-10-31 10/500 2026-11-02 06:00 by xzcv0Tehd8lQ
[考研] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 16/800 2026-11-02 05:47 by xzcv0Tehd8lQ
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 21/1050 2026-11-02 05:41 by xzcv0Tehd8lQ
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 hKe7U1kad5Sg 2026-10-31 5/250 2026-11-02 03:39 by xzcv0Tehd8lQ
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 hKe7U1kad5Sg 2026-10-31 9/450 2026-11-02 03:26 by xzcv0Tehd8lQ
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 hKe7U1kad5Sg 2026-10-31 5/250 2026-11-01 22:24 by xzcv0Tehd8lQ
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 11/550 2026-11-01 21:35 by xzcv0Tehd8lQ
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 15/750 2026-11-01 16:52 by BCdvBAEpt3zm
[考研] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 16/800 2026-11-01 12:14 by BCdvBAEpt3zm
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 X5bHxOULxFqb 2026-10-30 18/900 2026-11-01 12:11 by BCdvBAEpt3zm
[硕博家园] 申博自荐 2篇一区TOP+1篇EI+2公开发明专利 2027博士申请 +3 小小阿光 2026-10-27 3/150 2026-10-29 23:56 by 起风了的快乐
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭