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western小白求助-内参相关已有4人参与
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本人第一次做western，还在摸索中，希望有经验的虫友帮忙： 关于内参的使用方法（本人可以查到的）如下，选哪种方法更合理和保险呢，希望大神帮忙。 ①同时跑两个胶，一个转膜后，用来孵育目标蛋白抗体；另一个转膜后，用来孵育内参抗体。 ②跑一个胶，转膜后，先孵育目标蛋白抗体。然后，直接孵育内参抗体。 ③现在有专门的抗体去除液，可以实现用同一个膜：孵育完目标蛋白抗体，并显色；用去除液去除抗体，再孵育内参抗体，显色。 注：我的目标蛋白是一种细胞膜蛋白，分子量有好多个27,43,47,67,55,117KDa；内参用的是GAPDH（37KDa） 另外，我想定性我的目标蛋白，这需要在转完膜后将膜染色，然后跟蛋白Marker对比吗？还是到发光那一步，目标条带和Marker都会跑到X光片上？ |
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