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克隆的3β-HSD(3β-羟基固醇脱氢酶)基因，跟底物反应时，不能把3号位的羟基转化为酮 已有1人参与
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最近克隆了乳酸菌的3β-HSD(3β-羟基固醇脱氢酶)基因，用的是pmal-c5x载体，表达用的是BL21 诱导完之后，跑了SDS-page 有明显的条带，能表达出来 但是克隆完的基因跟底物反应时，不能把3号位的羟基转化为酮。 有人克隆过HSD基因吗？看别的论文，都是从人或小鼠等动物，克隆HSD基因的，是不是克隆微生物基因就不可以呀？？ 还有要是克隆人或动物基因时，也能用PMAL-C5X这个载体吗？？还有BL21 请各位大神多多指点，如有建设性很强的回帖，我会额外给金币的。 |
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【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+5, 鼓励回帖交流！ 2014-08-13 15:26:46
deny224: 金币+2, ★有帮助 2014-08-13 17:56:19
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1. “克隆人或动物基因时，也能用PMAL-C5X这个载体吗？？还有BL21”，跟基因来源无关的，可以。 2. 有蛋白表达，无活性，也是很常见的现象。原因可能是折叠不正确，不稳定，等等。 3. “...基因”不能催化反应，应该是酶催化反应。请更正。 4. 脱氢酶转化的话，通常需要参与H+转移的辅酶，不知你的反应条件如何？是否恰当？ 5. 脱氢酶催化反应在应用时会很有难度，需要添加辅酶等解决H+转移和再生问题？ 6. 做不出来的话，建议先按文献中的方法做，及先做人源或小鼠源的。 |
2楼2014-08-13 10:52:56
3楼2014-08-13 12:52:20