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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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qiqie723

铜虫 (初入文坛)

[交流] 求助:引物设计好了,OD怎么算的要加入多少水?

我的引物是:CAGGCCTAACACATGCAAGTC, 现在有1个OD,请教该怎么计算该加入多少水?还请高手指教,在此先谢谢了!
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黑罕

金虫 (小有名气)

★ ★ ★
reasonspare(金币+3,VIP+0):谢谢分享,欢迎常来
1. Oligo DNA是以OD260单位来计算的,这是指在1ml体积1cm光程标准比色皿中,260nm波长下吸光度为1A260的Oligo溶液定义为1 OD260单位,根据此定义,1 OD260单位相当于33μg的Oligo DNA,您可以根据此数据和您的Oligo DNA分子量,计算得到摩尔数以计算不同摩尔浓度的溶液。

2. 引物序列的分子量计算公式如下:
MW=(A碱基数×312)+(C碱基数×288)+(G碱基数×328)+(T碱基数×303)-61
例如:引物TGGGCGGCGGTTGGTGTTACG   A=1 C=3 G=11 T=6
MW=(1×312)+(3×328)+(6×303)-61=6541

3. Oligo DNA的分子量也可以用以下近似方法计算:Oligo DNA中的每个脱氧核苷酸碱基的平均分子量近似为324.5,则一条Oligo DNA的分子量=碱基数×324.5。
例:您得到一管标为5 OD260的20 mer Oligo DNA
分子量=20×324.5=6490
质量数=5×33=165μg
摩尔数=165/6490=0.025μmol=25nmol
若加灭菌双蒸水400μl溶解,则浓度为25nmol/400μl=62.5μM

4. 装有引物的eppendorf管一般保存于-20℃,临用前稀释。

5. 由于Oligo DNA呈很轻的干膜状附在管壁上,打开时极易散失,所以打开管子前请先离心10,000rpm,1min,然后再慢慢打开管盖。

6. 在装有引物的eppendorf管内加入100-500μl双蒸水,盖上管盖,充分上下振荡5-10分钟,再次离心10,000rpm,1min。

7. 计算原引物管primer的浓度(必要时测OD260核对厂家提供引物量是否正确)。

8. 计算并将应用primer稀释为10pmol/μl。

9. 标明原引物管、应用引物管、稀释方法,置-20℃保存。



比较复杂
简单的方法是电话询问引物合成公司
直接问明如何配制
2楼2008-04-10 22:02:17
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qiqie723

铜虫 (初入文坛)

黑罕,非常感谢你帮我解答,而且答的如此详细,谢谢啊!
3楼2008-04-11 07:34:40
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