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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸杂交 » T7体外转录
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songzuowei

木虫 (著名写手)

[求助] T7体外转录 已有2人参与

有没有哪位大神用过T7体外转录试剂盒？合成的RNA是否是单链？这样合成的RNA跑琼脂糖凝胶电泳能看到吗？条带应该是什么样子？请大神赐教！
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1楼 2014-08-11 13:22:41
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songzuowei

木虫 (著名写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by soarrow at 2014-08-12 12:13:00
跑PAGE胶是变性胶，一般多用甲酰胺作为RNA变性剂，用于打开二级结构，我们以前做的时候是银染。
具体的应该有资料和试剂盒可以查询，我那是十来年前做的了，细节记不大清楚了

按道理我也认为体外转录的RNA是单链的 是不能用普通琼脂糖凝胶电泳检测的 但网上还有很多资料说是可以的 体外转录后可以看到两条带 一条模板DNA 一条是转录成的RNA 所以我感到有点摸不着头脑了
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7楼2014-08-12 13:01:57
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bio_sci

捐助贵宾 (正式写手)
做过这个酶，重组表达的

[ 发自小木虫客户端 ]
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2楼2014-08-11 14:09:57
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songzuowei

木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by bio_sci at 2014-08-11 14:09:57
做过这个酶，重组表达的

大神 那你们重组表达的这个酶有活性吗？能体外合成RNA吗？是跑电泳检测的吗？
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3楼2014-08-11 16:41:57
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soarrow

铁杆木虫 (正式写手)

酱油歪楼党

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+4, 鼓励交流 2014-08-11 19:20:15
songzuowei: 金币+2, ★★★很有帮助 2014-08-12 10:37:27
用过，这个出来的当然是ssRNA。
普通琼脂糖凝胶电泳是看不到的，如果看到的话肯定是你的DNA模板---消化不干净
要看到ssRNA，只能跑变性PAGE胶，或者使用安捷伦的Bioanalyzer 2100 + RNA Nano Chip
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4楼2014-08-11 18:18:08
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