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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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我家有芒果

管理员

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

[求助] 三引物法鉴定突变体为何野生型(LB与RP)也有条带?求大神指导! 已有2人参与

采用三引物法做插入突变体鉴定时,在用(LB与RP)组合鉴定野生型时也出现与突变体中一样的条带(其中LB、RB、RP、LP都是出售种子的单位提供的),求大神指教,不胜感激!谢谢
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xiemin217

主管区长

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
1.种子是不是在TAIR买的,有专门的T-DNA引物的网站(http://signal.salk.edu/tdnaprimers.2.html),输SALK号就可以看到。不用梯度去跑。
2.野生型有带,除了样品混了,是不是引物的问题。
4楼2014-08-09 19:44:08
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zjwang

专家顾问

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【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
野生型中条带的亮度和突变体中一样吗?提取DNA的时候野生型有污染吗?
2楼2014-08-09 16:56:05
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我家有芒果

管理员

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引用回帖:
2楼: Originally posted by zjwang at 2014-08-09 16:56:05
野生型中条带的亮度和突变体中一样吗?提取DNA的时候野生型有污染吗?

嗯,谢谢前辈!
1.提取DNA时候都是分不同的EP管在管中研磨的,应该不会污染,这个我再试一次看看
2.有个问题我一直比较困惑就是我在LB与RP组合鉴定突变时做的是48-58度的梯度PCR,结果都出现了不只一条的非特异性的条带,且都很亮。
3楼2014-08-09 18:02:32
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