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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 毛细管电泳专题
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ljxn

金虫 (著名写手)
请教：胶束毛细管电泳的表面活性剂的加入方法和量大概是怎样的啊？

【yensh回复】：加入方法一般采用在缓冲溶液中加入。加入量与各表面活性剂的CMC浓度有关，必须高于CMC才能形成胶束！

[ Last edited by yensh on 2008-8-17 at 01:50 ]
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81楼2008-08-12 09:53:00
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asaki

铜虫 (小有名气)
大家好！我的课题大方向也是毛细管电泳，之前做过一部分CE-ED和UV的黄酮类物质分离检测，但是并未深入到动力学方面，现在需要确定一个专门的研究课题，想要做CEC，还是用ED和UV检测，在色谱和电泳的动力学方面深入，希望高手们可以给些相关建议，比如现在在这些方面可以做哪些更有价值的研究，从哪些角度深入比较有创新和可行性
期待解答！谢谢！

【yensh回复】我的个人看法：单纯CE应用一般来说无法发表高水平的论文！我的建议是查阅最新有关CEC的文献，明确相关研究的最新进展。

[ Last edited by yensh on 2008-8-17 at 01:56 ]
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82楼2008-08-13 20:25:08
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jingjin

铜虫 (初入文坛)
如果用毛细管电泳检测纳米金粒子 通常会用520纳米的波长 想问210纳米的波长是否可用?请高手指点

【yensh回复】Just do it！可能干扰会比较大，做做看比较一下！

[ Last edited by yensh on 2008-8-17 at 01:57 ]
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83楼2008-08-14 16:05:57
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plf0717

金虫 (小有名气)

化学发光前景!

各位前辈,问一下做化学发光前景怎么样啊???谢谢!

【yensh回复】如果找到很好的体系，极大提高检测灵敏度，前景无限光明！

[ Last edited by yensh on 2008-8-17 at 01:59 ]
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84楼2008-08-14 19:51:35
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myrealmadrid

铁虫 (小有名气)
分离蛋白质，有两种蛋白靠在一起，分不开，加点SDS试试，结果出来了好多乱七八糟的小峰，调整了好多SDS浓度还是不行~~~郁闷阿！怎么回事呀？而且貌似出峰顺序也改变了~~~

【yensh回复】CE分离蛋白，最致命的问题是吸附。可以考虑管壁修饰，两种修饰方法都可以。

[ Last edited by yensh on 2008-8-17 at 02:01 ]
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85楼2008-08-15 20:52:33
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凌波

银虫 (正式写手)
目前CE-AD可以做哪些更有价值的研究，从哪些角度深入比较有创新和可行性,希望高手们可以给些相关建议,期待解答！谢谢！
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86楼2008-08-16 10:08:31
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zcy800204

金虫 (正式写手)

毛细管电泳实验常见问题解答

★ ★ ★
dnp(金币+3,VIP+0):谢谢分享:)
毛细管电泳实验常见问题解答
目次        现象        检查
方案        检查现象/结果        可能原因        解决方法
1        无样品峰出现        检查电流是否稳定        没有电流        毛细管堵塞或断裂        用水冲洗毛细管，并观察是否有水流出，若无水流出请拆下卡盒检查毛细管两端和窗口是否断裂；毛细管没有断裂的话可以用水反向高压冲洗以试图解决此问题。缓冲溶液需要过滤，将样品过滤或者离心去除其中的颗粒。
                        电流波动很大，直至几乎消失        缓冲溶液中有气泡产生或者区带中样品析出        将缓冲溶液超声脱气，如果还有此现象发生，则可能是样品区带有析出，可以通过降低样品浓度/延长ramp time来试图解决这一问题；对于在缓冲溶液中溶解度不高的样品则需要在缓冲溶液中加入添加剂以解决此问题。
                        电流初始值较小，后逐渐增大        样品进样量过大        减少进样量，通常进样参数设置在0.5psi,5sec左右
                        电流正常        样品浓度过低        使用高浓度样品测试，如果无法解决则有可能是以下其他原因
                                检测波长设置不正确        请确认被分析物的特征吸收，检查方法中的检测波长设置
                                分离极性错误        对于蛋白样品，请注意蛋白在分离条件下其PI及所带电荷；对于核酸样品，通常条件下会带负电荷
                                样品在毛细管内壁吸附        对于蛋白及核酸样品应尽量采用涂层毛细管分离，或采用极端pH条件或动态涂层防止样品吸附。
                                光学检测器或光纤损坏        进行标准样品的测试，如果没有对应的结果出现，则有可能存在硬件问题，请联系工程师
                检查毛细管窗口        是否有透明窗口        忘记开毛细管窗口或窗口位置不正        重新开毛细管检测窗口，或将窗口调整到正确位置
2        样品峰出现拖尾                        样品在毛细管内壁吸附        对于蛋白及核酸样品应尽量采用涂层毛细管分离，或采用极端pH条件或动态涂层防止样品吸附。
3        样品峰形不对称        毛细管入口                毛细管入口切口不平齐        重新切割毛细管入口，注意毛细管切割方法，不可以用力过猛或反复刮擦
                更改样品溶剂                缓冲溶液与样品溶液电解率差别过大        可采用缓冲溶液作为样品溶剂
4        样品峰过宽        降低样品进样量        有改善        样品浓度太大        可降低样品浓度或减少进样量
                        无改善        样品本身性质不均一        此原因主要是针对蛋白样品，小分子样品发生的概率较低
5        迁移时间不稳定                出峰时间不稳定且无规律        缓冲溶液与毛细管内壁平衡较慢        每次样品运行之间避免用NaOH冲洗毛细管
                        出峰时间依次后延        样品中有物质易发生吸附        首先在每次样品运行之前用0.1N NaOH短时间冲洗毛细管，看迁移时间能否重复，如果效果不佳请使用涂层毛细管来改善结果或者将样品再次处理，以去除样品中易吸附的组分
6        峰形和出峰时间不稳定        更换缓冲溶液种类        峰形和时间稳定        缓冲溶液不稳定，易电解，或者是样品在原缓冲溶液条件下不稳定        更换其它种类的缓冲溶液
                        峰形和出峰情况仍不稳定        样品中物质易在毛细管内壁吸附        可采用涂层毛细管来克服此问题，或对样品进行前处理
7        电流泄漏（Current Leakage）        检查毛细管是否在窗口处断裂        毛细管断裂        毛细管内缓冲溶液流出造成电流泄漏        更换新毛细管，并用水清洗光纤头及检测窗口
                        毛细管无断裂        实验环境湿度过大        使用抽湿机，并打开仪器Cartridge Cover；如果没有抽湿机可以使用空调，在湿度过大的情况下可在仪器关闭时放置干燥剂，但是在仪器运行时一定要将干燥剂取出
8        无法加气压        检查瓶塞是否盖紧或更换瓶塞        更换后问题解决        瓶塞老化，失去弹性        请购买新的瓶塞，并注意瓶塞不可烘干，只能自然晾干
                                瓶颈处有液体，导致瓶塞易滑        向瓶中装液体时不要过满，也不要沾湿瓶颈
                        若瓶塞无问题，可先采用真空方式，若真空方式可以使用，但压力仍不可用        压力系统问题        请联系工程师
9        迁移时间可重复但峰面积重复性不好        重新切割毛细管两端        若问题解决        毛细管入口处不平        重新切割毛细管入口，注意毛细管切割方法，不可以用力过猛或反复刮擦
                        问题依然存在，尝试电动进样        若电动进样可保持重现，则压力控制或气路存在问题        请联系工程师
10        毛细管或电极易折断        检查瓶盖是否老化                瓶盖老化        购买新的瓶盖
                电极是否不垂直                电极不垂直        将电极拉直
                                       
                                       
11        冷却液泄漏        检查卡盒内垫圈和卡子                漏装或装错顺序        严格按照操作手册上的安装顺序安装
                                仪器内部管路密封不严        请联系工程师
12        PDA光强低        检测窗口Aperture型号                使用了窄细缝的Aperture        请在使用DAD检测器时务必使用标有8的Aperture
13        谱图基线不稳定        先用0.1N NaOH冲洗毛细管，然后不进样运行原方法        基线改善        则为样品中物质有吸附        重新预处理样品或更改电泳条件
                        基线未改善        毛细管内有强烈吸附，或缓冲体系不稳定        更换新的毛细管，不进样，只运行缓冲，观察基线情况
                更换新毛细管后基线仍然不稳，可采用Run Buffer A测试        基线改善        缓冲溶液与毛细管内壁平衡较慢        更换缓冲溶液种类，若基线变化对检测无干扰，可保持原来电泳条件
                        基线无改善        检测光源或其他光学器件不正常        请联系工程师

非常重要：当实验现象不正常时首先应检查电流是否稳定；而采用仪器装机时附带的Run Buffer A和Test Mix B来测试仪器则有助于您和我们的判断判断问题的所在。
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87楼2008-08-22 10:54:35
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padodo

至尊木虫 (职业作家)

胖嘟嘟

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引用回帖:
Originally posted by ljxn at 2008-8-5 16:50:
你好，先声明我是新手哈。我用ce分离时在2min处有一个未分离的峰。不太清楚是一个峰分裂呢，还是两个未分开，峰高不大，约在2.0mAU。如果是分离没开，请问有哪些优化条件呢？谢谢各位专家。

[ Last edited  ...

首先你要判断这个峰是系统峰，还是噪音，还是分析物产生的。如果重复实验可以重现基本上可以排除噪音~~然后要排除是系统峰的可能，方法是进空白样品看是否有峰~~~最后如果你要判断是不是两个峰没有分开，方法很简单，一般来说看峰形就能看得出来，然后把两种物质的标准品单独进样看迁移时间是不是一样~~~~如果是分离没有分开，一般的分辨方法是调节pH和加入缓冲添加剂，如表面活性剂、有机溶剂等等
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我有什么能帮助您的吗？
88楼2008-08-24 17:23:43
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padodo

至尊木虫 (职业作家)

胖嘟嘟

优秀版主
引用回帖:
Originally posted by jingjin at 2008-8-14 16:05:
如果用毛细管电泳检测纳米金粒子 通常会用520纳米的波长 想问210纳米的波长是否可用?请高手指点

【yensh回复】Just do it！可能干扰会比较大，做做看比较一下！

[ Last edited ...

我不知道你是从哪里看到的用520nm来检测进纳米粒子，呵呵，从我自己的实验经验来看，和你说的恰恰相反，一般都是用200多的短波长来检测纳米金，520可能得不到任何峰
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我有什么能帮助您的吗？
89楼2008-08-24 18:07:40
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padodo

至尊木虫 (职业作家)

胖嘟嘟

优秀版主
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
dnp(金币+10,VIP+0):呵呵，回来啦，谢谢:)
引用回帖:
Originally posted by myrealmadrid at 2008-8-15 20:52:
分离蛋白质，有两种蛋白靠在一起，分不开，加点SDS试试，结果出来了好多乱七八糟的小峰，调整了好多SDS浓度还是不行~~~郁闷阿！怎么回事呀？而且貌似出峰顺序也改变了~~~

【yensh回复】CE分离蛋 ...

可以考虑微调一下pH值，看看对分离的影响。pH会很强烈地影响蛋白质的荷电性质
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我有什么能帮助您的吗？
90楼2008-08-24 18:25:20
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