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yensh

金虫 (文坛精英)

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[交流] 毛细管电泳专题

毛细管电泳专题

专家应助索引已出，见2楼

交流群：62879294

_______________________________________________________

前言：

引用回帖:

为了更好地对来分析版求助的虫子们给予及时的答复，

并为后来求助的虫子们提供一个参考，

分析版邀请多年从事相关研究的专家为大家答疑；

所提的问题都必须在此主题贴内跟帖，

由专家们进行解答，以及商讨解决问题。

*********************************************************************************

求助建议：

引用回帖:

1. 提问

提问时候建议将

仪器信息、

样品处理方法、

分析条件、

样品简要信息进行详细的表述，最好提供谱图。

2. 反馈

请虫子们得到答案后通过实验后解决问题，

欢迎回来汇报问题解决状况，让大家通过反馈学习知识；

对于积极反馈信息的虫子，给与一定的奖励。

***********************************************************************************

毛细管电泳专家组：

nls2008; yuanjp871; padodo

专家简介

nls2008
引用回帖:
做了一年多电泳电化学发光

yuanjp871
引用回帖:
从事毛细管电泳研究3年

padodo
引用回帖:
从事Beckman MDQ有4年;
一些原创帖：
http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=537695
http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=542636
http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=702753
http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=703067

温馨提示：

引用回帖:

1. 附件上传：如果是谱图，请作为附件上传，将你的谱图存为图片的格式，点击帖子最下方，快速回帖对话框上方的回复主题按钮，即可上传附件；
请注意：上传附件请首先点击编辑附件，然后再点击回复帖子，这样才能完成附件上传。
2. 对于专家而言，可能回答不了所有的问题，因此请将你的问题尽量讲清楚明了，否则将会浪费你的时间并得不到最好的答案，需要讨论的话，请在帖子中进行讨论，当然其他虫子如果对这个问题有了比较好的解决方案，也可以回帖。

得到了答案后，解决了问题，别忘了回来哦……^_^

希望大家多多交流，共同进步……

[ Last edited by yensh on 2008-9-13 at 17:35 ]

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1楼 2008-04-10 12:54:19

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

zcy800204

金虫 (正式写手)

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毛细管电泳实验常见问题解答

★ ★ ★
dnp(金币+3,VIP+0):谢谢分享:)

毛细管电泳实验常见问题解答
目次现象检查
方案检查现象/结果可能原因解决方法
1 无样品峰出现检查电流是否稳定没有电流毛细管堵塞或断裂用水冲洗毛细管，并观察是否有水流出，若无水流出请拆下卡盒检查毛细管两端和窗口是否断裂；毛细管没有断裂的话可以用水反向高压冲洗以试图解决此问题。缓冲溶液需要过滤，将样品过滤或者离心去除其中的颗粒。
电流波动很大，直至几乎消失缓冲溶液中有气泡产生或者区带中样品析出将缓冲溶液超声脱气，如果还有此现象发生，则可能是样品区带有析出，可以通过降低样品浓度/延长ramp time来试图解决这一问题；对于在缓冲溶液中溶解度不高的样品则需要在缓冲溶液中加入添加剂以解决此问题。
电流初始值较小，后逐渐增大样品进样量过大减少进样量，通常进样参数设置在0.5psi,5sec左右
电流正常样品浓度过低使用高浓度样品测试，如果无法解决则有可能是以下其他原因
检测波长设置不正确请确认被分析物的特征吸收，检查方法中的检测波长设置
分离极性错误对于蛋白样品，请注意蛋白在分离条件下其PI及所带电荷；对于核酸样品，通常条件下会带负电荷
样品在毛细管内壁吸附对于蛋白及核酸样品应尽量采用涂层毛细管分离，或采用极端pH条件或动态涂层防止样品吸附。
光学检测器或光纤损坏进行标准样品的测试，如果没有对应的结果出现，则有可能存在硬件问题，请联系工程师
检查毛细管窗口是否有透明窗口忘记开毛细管窗口或窗口位置不正重新开毛细管检测窗口，或将窗口调整到正确位置
2 样品峰出现拖尾样品在毛细管内壁吸附对于蛋白及核酸样品应尽量采用涂层毛细管分离，或采用极端pH条件或动态涂层防止样品吸附。
3 样品峰形不对称毛细管入口毛细管入口切口不平齐重新切割毛细管入口，注意毛细管切割方法，不可以用力过猛或反复刮擦
更改样品溶剂缓冲溶液与样品溶液电解率差别过大可采用缓冲溶液作为样品溶剂
4 样品峰过宽降低样品进样量有改善样品浓度太大可降低样品浓度或减少进样量
无改善样品本身性质不均一此原因主要是针对蛋白样品，小分子样品发生的概率较低
5 迁移时间不稳定出峰时间不稳定且无规律缓冲溶液与毛细管内壁平衡较慢每次样品运行之间避免用NaOH冲洗毛细管
出峰时间依次后延样品中有物质易发生吸附首先在每次样品运行之前用0.1N NaOH短时间冲洗毛细管，看迁移时间能否重复，如果效果不佳请使用涂层毛细管来改善结果或者将样品再次处理，以去除样品中易吸附的组分
6 峰形和出峰时间不稳定更换缓冲溶液种类峰形和时间稳定缓冲溶液不稳定，易电解，或者是样品在原缓冲溶液条件下不稳定更换其它种类的缓冲溶液
峰形和出峰情况仍不稳定样品中物质易在毛细管内壁吸附可采用涂层毛细管来克服此问题，或对样品进行前处理
7 电流泄漏（Current Leakage）检查毛细管是否在窗口处断裂毛细管断裂毛细管内缓冲溶液流出造成电流泄漏更换新毛细管，并用水清洗光纤头及检测窗口
毛细管无断裂实验环境湿度过大使用抽湿机，并打开仪器Cartridge Cover；如果没有抽湿机可以使用空调，在湿度过大的情况下可在仪器关闭时放置干燥剂，但是在仪器运行时一定要将干燥剂取出
8 无法加气压检查瓶塞是否盖紧或更换瓶塞更换后问题解决瓶塞老化，失去弹性请购买新的瓶塞，并注意瓶塞不可烘干，只能自然晾干
瓶颈处有液体，导致瓶塞易滑向瓶中装液体时不要过满，也不要沾湿瓶颈
若瓶塞无问题，可先采用真空方式，若真空方式可以使用，但压力仍不可用压力系统问题请联系工程师
9 迁移时间可重复但峰面积重复性不好重新切割毛细管两端若问题解决毛细管入口处不平重新切割毛细管入口，注意毛细管切割方法，不可以用力过猛或反复刮擦
问题依然存在，尝试电动进样若电动进样可保持重现，则压力控制或气路存在问题请联系工程师
10 毛细管或电极易折断检查瓶盖是否老化瓶盖老化购买新的瓶盖
电极是否不垂直电极不垂直将电极拉直

11 冷却液泄漏检查卡盒内垫圈和卡子漏装或装错顺序严格按照操作手册上的安装顺序安装
仪器内部管路密封不严请联系工程师
12 PDA光强低检测窗口Aperture型号使用了窄细缝的Aperture 请在使用DAD检测器时务必使用标有8的Aperture
13 谱图基线不稳定先用0.1N NaOH冲洗毛细管，然后不进样运行原方法基线改善则为样品中物质有吸附重新预处理样品或更改电泳条件
基线未改善毛细管内有强烈吸附，或缓冲体系不稳定更换新的毛细管，不进样，只运行缓冲，观察基线情况
更换新毛细管后基线仍然不稳，可采用Run Buffer A测试基线改善缓冲溶液与毛细管内壁平衡较慢更换缓冲溶液种类，若基线变化对检测无干扰，可保持原来电泳条件
基线无改善检测光源或其他光学器件不正常请联系工程师

非常重要：当实验现象不正常时首先应检查电流是否稳定；而采用仪器装机时附带的Run Buffer A和Test Mix B来测试仪器则有助于您和我们的判断判断问题的所在。