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skyme17

铁虫 (小有名气)

[交流] 谁知道考马斯亮蓝的染色原理?

最近在做SDS电泳,实验中出了点问题,我觉得可能是染色有问题,所以很想知道考马斯亮蓝的染色原理,我现在只知道是和蛋白质有反应,具体是和蛋白质怎么反应的?或者是和什么基团有反应啊??  请教各位高手了! 谢谢
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huang1962

银虫 (小有名气)


reasonspare(金币+1,VIP+0):谢谢分享,欢迎常来
The Coomassie dyes binds to proteins via physisorption to arginine, the aromatic amino acids, and histidine
2楼2008-04-09 23:06:13
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hihoney

铁杆木虫 (职业作家)



reasonspare(金币+1,VIP+0):有详细介绍就好了
多从胶,染色液,缓冲液上找原因,昨天两块胶都跑花了,换了缓冲液,嘿,好了
3楼2008-04-09 23:18:11
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wzh0209

木虫 (正式写手)

★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):谢谢分享,欢迎常来
考马斯亮兰G-250是一种染料,在游离状态下呈红色,最大吸收峰在465nm。当它与蛋白质结合后变成深蓝色,最大吸收峰变为595nm。蛋白质含量在1-1000μg范围内,蛋白质-染料复合物在595nm处的吸光度与蛋白质含量成正比,故可用比色法测定。
蛋白质-染料复合物具有很高的吸光值,因此大大提高了蛋白质测定的灵敏度,最低检出量为1μg蛋白。染料与蛋白质结合迅速,大约为2分钟,结合物的颜色在1小时内稳定.
4楼2008-04-10 10:45:41
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skyme17

铁虫 (小有名气)

二楼的说考马斯蓝只是和那几个氨基酸物理附着么??有没有什么影响因素能破坏这个附着的?
5楼2008-04-10 11:41:39
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skyme17

铁虫 (小有名气)

三楼的  我的情况是其他样品都能跑出来,就有其中一个样品没有任何条带,但是样品是有酶活的! 所以很奇怪,想不明白!
6楼2008-04-10 11:42:53
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skyme17

铁虫 (小有名气)

四楼的,呵呵,这个方法我昨天也查到了,就是不知道具体和蛋白质怎么反应,所以才问的!呵呵
7楼2008-04-10 11:43:48
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skyme17

铁虫 (小有名气)

谢谢各位了,呵呵!继续请各位高手指点啊
8楼2008-04-10 11:44:36
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skyme17

铁虫 (小有名气)

我顶  不能沉啊   问题还没解决呢   呵呵
9楼2008-04-10 22:16:14
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潘阳

木虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
考马斯亮蓝有2个SO3H基团,偏酸性,可以和蛋白质的碱性基团结合。(若不信可参考《蛋白质电泳实验技术》63页)
10楼2011-08-19 16:54:38
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