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guozhongbaono1木虫 (正式写手)
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[交流]
【求助/交流】 我拿什么来拯救你，我的RNA
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提RNA也有一段时间了，刚进实验室的时候可能是新手手气好，提的可以，可是年后说死也提不好了，各种试剂、耗材都换了！ 我实在没办法了求各位大侠帮帮我吧！！！ 要不就毕不了业啦！！！ 这是我年前提的图 怎么图片上传不了啊！！！ |
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zhangchong121
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3楼2008-04-10 10:37:58
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2楼2008-04-10 09:52:35
guozhongbaono1
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zhangchong121虫友说的有道理啊！！！ 谢谢先 所以的试剂、耗材都处理过了（DEPC等）、干热（200度、3小时）、高压灭菌等！ 我提的是鱼的组织（肌肉），新鲜样和冻存都做过了。 新鲜样取样后（0.1g），立即放入1ml的Trizol1.5ml的离心管中，用电匀浆器匀浆后按步骤操作： 1.匀浆后静止5min,4度12000转离心10min，取上清于新离心管中。 2.在新管中加入0.2ml的预冷的氯仿，剧烈混匀15秒（手动，呵呵），静止5min，4度12000转离心15min. 3.取上清（宁缺毋滥）加入新管中，加入预冷的0.5ml的异丙醇，混匀（手动），-20度放置40分钟，4度12000转离心10min。 4.之后对沉淀用75%乙醇（现用现配的用DEPC处理过的水）洗涤2次，尽量弃75%乙醇（弃上清再离心！！！） 5.干燥，用DEPC处理过的水溶解，56度水浴6分钟。 6.跑胶：1%的胶，电压120V 20分钟 上样4微升 也不知道写的全面不？ 谢谢指点迷津！！！！！！！！！ |
4楼2008-04-10 11:10:58
guozhongbaono1
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5楼2008-04-10 15:40:28
