应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物信息 » 质粒测序后blast结果分析（菜鸟求助）
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
162/2返回列表上一页12
查看: 4912  |  回复: 15
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

杨仔

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
应该是对的，两边对不上的是载体的MCS，中间完全匹配的是你的目的基因。
赞一下 回复此楼
11楼2014-08-07 14:45:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

人于两点

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by songzuowei at 2014-08-07 08:45:50
你这个测序，每次测不一定完全正确 有可能会发生个别碱基突变 但只要氨基酸不突变即可 你把拼好的与原始基因序列比对一下，只要测出来的是你的目的基因序列即可 两边的还有载体序列啊 没事的...

恩恩，找到原因了。那大神能解释一下，引物设计时保护碱基的作用吗？谢啦！
赞一下 回复此楼
12楼2014-08-07 15:28:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

happydove

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
人于两点: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-08-07 15:47:30
拼接方法：首先下游引物测序结果反向互补，和上游引物测序结果比对，这个你会吧，各种软件还有NCBI都可以。
比对结果会有中间一段是重复的，因为从基因的两头测，都测了1K多，而你的基因才1K多，肯定会重复的。然后把下游引物测序结果重复下面的序列和上游的序列拼接到一块儿。最后在这条新的序列上找到你的上下游引物，也就找到了你的目的基因。下面的说一下分析，找到以后再和你的真正目的基因序列比对，看看测序结果有没有问题，如果有问题，再去看测序的峰图是否有问题。如果比对没问题，ok，测序是正确的。
赞一下 回复此楼
13楼2014-08-07 15:39:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

songzuowei

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
人于两点: 金币+3, ★★★很有帮助 2014-08-08 11:15:48
引用回帖:
12楼: Originally posted by 人于两点 at 2014-08-07 15:28:53
恩恩，找到原因了。那大神能解释一下，引物设计时保护碱基的作用吗？谢啦！...

首先咱也是菜鸟一个，这里有点资料，希望对你有帮助，共同学习吧。
克隆PCR产物的方法之一，是在PCR产物两端设计一定的限制酶切位点，经酶切后克隆至用相同酶切的载体中。但实验证明，大多数限制酶对裸露的酶切位点不能切断。必须在酶切位点旁边加上一个至几个保护碱基，才能使所定的限制酶对其识别位点进行有效切断。
下表列举了15种限制酶，分别比较了各种限制酶在其酶切位点旁边分别加0、1、2、3个保护碱基后的切断情况。表中的：(-) 为不能切断；(±) 为不能完全切断；(+) 为能完全切断。
结果显示，基本上所有限制酶，在其酶切位点旁边加上3个以上的保护碱基后，可以对其酶切位点进行有效切断。
Enzyme Base Pairs from Terminus
0 1 2 3
Apa I － － ± +
BamH I － ± + +
BstX I － ± + +
Cla I － ± + +
EcoR I － ± + +
EcoR V － + + +
Hind III － － － +
Not I － － + +
Pst I － － ± +
Sac I － ± + +
Sal I + + + +
Sma I － ± + +
Spe I + + + +
Xba I － ± + +
Xho I － － ± +
赞一下(2人) 回复此楼
14楼2014-08-07 16:57:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

人于两点

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
14楼: Originally posted by songzuowei at 2014-08-07 16:57:02
首先咱也是菜鸟一个，这里有点资料，希望对你有帮助，共同学习吧。
克隆PCR产物的方法之一，是在PCR产物两端设计一定的限制酶切位点，经酶切后克隆至用相同酶切的载体中。但实验证明，大多数限制酶对裸露的酶切位 ...

谦虚了，大神。
回复此楼
15楼2014-08-08 11:17:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小佳佳佳佳

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
14楼: Originally posted by songzuowei at 2014-08-07 16:57:02
首先咱也是菜鸟一个，这里有点资料，希望对你有帮助，共同学习吧。
克隆PCR产物的方法之一，是在PCR产物两端设计一定的限制酶切位点，经酶切后克隆至用相同酶切的载体中。但实验证明，大多数限制酶对裸露的酶切位 ...

测序结果怎么统计呢。我们做表格统计来源时是把所有列出来的来源都写上去吗？还是自己随意挑选一个
赞一下 回复此楼
16楼2014-12-10 16:44:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 人于两点 的主题更新
162/2返回列表上一页12
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0703调剂，一志愿天津大学319分 +11 haaaabcd 2026-04-05 11/550 2026-04-06 09:36 by jp9609
[考研] 一志愿211，化学学硕，310分，本科重点双非，求调剂 +13 努力奋斗112 2026-04-04 13/650 2026-04-06 07:13 by jj987
[考研] 377求调剂 +6 by.ovo 2026-04-05 6/300 2026-04-05 22:18 by dongzh2009
[考研] 求调剂 +3 小沢 2026-04-03 3/150 2026-04-05 09:10 by sihailian3
[考研] 一志愿北京化工大学，初试成绩350求调剂 +9 沿岸?贝壳 2026-04-04 14/700 2026-04-05 01:09 by 沿岸?贝壳
[考研] 311分 22408 求调剂 +3 bing_bot 2026-04-03 3/150 2026-04-05 00:43 by chongya
[考研] 一志愿安徽某211 0703化学总分339求调剂 +6 晚风不晚 2026-04-04 6/300 2026-04-04 20:11 by dongzh2009
[考研] 349求调剂 +11 zwjjjjjj 2026-03-31 11/550 2026-04-04 19:52 by 蓝云思雨
[考研] 材料专业383求调剂 +8 郭阳阳阳成 2026-04-03 8/400 2026-04-04 10:29 by Rednal.
[考研] 26调剂 086003 +6 失活的细胞 2026-04-04 6/300 2026-04-04 09:50 by zhangdingwa
[考研] 一志愿双非085502，267分，过四级求调剂 +3 再忙也要吃饭啊 2026-04-03 3/150 2026-04-04 05:03 by gswylq
[考研] 350一志愿北京航空航天大学08500材料科学与工程求调剂 +5 kjnasfss 2026-04-03 5/250 2026-04-03 22:29 by 无际的草原
[考研] 274求调剂 +9 顺理成张 2026-04-03 10/500 2026-04-03 15:10 by 啊俊！
[考研] 316求调剂 +14 舟自梗 2026-04-01 18/900 2026-04-03 10:28 by linyelide
[考研] 348求调剂 +11 zzzzyk123 2026-04-01 11/550 2026-04-02 16:52 by Wang200018
[考研] 一志愿北京科技大学085601材料工程英一数二初试总分335求调剂 +8 双马尾痞老板2 2026-04-02 9/450 2026-04-02 14:45 by 5896
[考研] 08生物与医药专硕初试346找调剂 +6 dianeeee 2026-04-01 7/350 2026-04-02 08:23 by guoweigw
[考研] 一志愿北交大材料工程，总分358 +4 cs0106 2026-04-01 4/200 2026-04-02 07:42 by 尚水阁主
[考研] 311求调剂 +10 李芷新1 2026-03-31 10/500 2026-04-01 14:38 by chenqifeng666
[考研] 本科211总分289，08工学真心求调剂 +3 utopiaE 2026-03-30 3/150 2026-03-30 23:42 by ms629
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭