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眼角不在落泪

新虫 (初入文坛)

[求助] whole Transcription Amplification 已有2人参与

亲们，这个whole Transcription  Amplification的试剂为什么要在冰上解冻，后加热
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1楼 2014-08-06 09:30:24
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gaoyang636

木虫 (著名写手)
哪个公司的哪款kit里的试剂？
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2楼2014-08-06 10:28:54
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ssssllllnnnn

至尊木虫 (知名作家)

Translator and Proofreader

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
眼角不在落泪(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-08-06 13:14:51
任何涉及蛋白，特别是酶类等都需要在冰上操作，从冰箱内取出后当然要在冰上解冻，这是常识。即便如此，许多酶经过多次反复冻融后便会失去活性，所以需要分装小份保存。
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3楼2014-08-06 10:47:23
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眼角不在落泪

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gaoyang636 at 2014-08-06 10:28:54
哪个公司的哪款kit里的试剂？

Sigma -Aldrich  的WTA1和WTA2(whole Transcription  Amplification  kit）
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4楼2014-08-06 17:26:59
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眼角不在落泪

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by ssssllllnnnn at 2014-08-06 10:47:23
任何涉及蛋白，特别是酶类等都需要在冰上操作，从冰箱内取出后当然要在冰上解冻，这是常识。即便如此，许多酶经过多次反复冻融后便会失去活性，所以需要分装小份保存。

谢谢
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5楼2014-08-06 17:32:16
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眼角不在落泪

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gaoyang636 at 2014-08-06 10:28:54
哪个公司的哪款kit里的试剂？

请问有用过这款试剂吗？有很多不明白的地方需要指导
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6楼2014-08-06 17:34:15
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gaoyang636

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-08-06 18:19:48
我于是又跑到sigma官网上搜protocol……（http://www.sigmaaldrich.com/chin ... ification-kit1.html）建议楼主以后提问尽量多提供一些信息，比如厂商、试剂全称、甚至网页链接。节省回答者时间，也有利于你的疑问得到解答。

由于用到的几个试剂是冻存的，所有使用前要融化，这点没有疑问吧？
然后第一个加热步骤，protocol上也写了，是为了溶解可能存在的溶液析出/结晶；
第二个加热步骤时，酶并没有加入体系，不必担心对酶活造成影响。这一步的作用应该是为了打开你的RNA sample的高级结构，便于参加下游的酶促扩增反应。
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7楼2014-08-06 17:44:31
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眼角不在落泪

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by gaoyang636 at 2014-08-06 17:44:31
我于是又跑到sigma官网上搜protocol……（http://www.sigmaaldrich.com/china-mainland/zh/technical-documents/protocols/biology/whole-transcriptome-amplification-kit1.html）建议楼主以后提问尽量多提供一些信 ...

谢谢，那在热循环加热器中那几个温度和时间分别都是什么作用呢？谢谢

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8楼2014-08-07 09:47:58
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