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bijiaoyingyang

金虫 (小有名气)

[交流] 求助

求助各位师兄(姐,弟,妹):
     我最近在做外源重组基因在酵母KM71中的诱导表达,但是菌液生长两天后,OD值始终在2.2--2.6之间,再继续培养一天,OD值也只有微小的增长,但是绝对到不了3。 菌液看上去很浓稠了,就是OD值小。当然YPD培养液和OD值测定都已经核查过多次了,没有问题。
     请大家帮忙给看看,指点迷津!!谢谢。
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bijiaoyingyang

金虫 (小有名气)

继续求助(补充说明)

存在“OD值始终在2.2--2.6之间,到不了3, 菌液看上去很浓稠了”这个问题。所以在蛋白质纯化时,很难得到目的蛋白或者极其少。实际是经常得不到,我个人估计就是因为OD值太低。但是,很多文章报道很容易把OD值摇到5--6的,而且在诱导的第3天就会出现表达高峰。
      而我摇的OD值始终在2.2--2.6之间,在第6天才会有高峰出现,且绝大多数为非目的蛋白。因为我在诱导的第3,4,5天都用SDS-PAGE 电泳检测过,基本没有目的蛋白出现。
     望指点!谢谢。Sample Text
2楼2008-04-09 17:35:00
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yellow.

是不是溶氧有限呀?
3楼2008-04-14 09:59:09
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