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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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Phoebe.Lee

管理员

。。。

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

[求助] PCR求指点 已有35人参与

自己设计的引物扩增基因编码区序列
上游引物:  CCGGAATTC ATGGCCGCGCAGCTGCTGGAGG                 
下游引物:CGCGTCGA CTCAGCTGAGCACCTCTTCCTGGGGC      
加了酶切位点和保护碱基   
引物合成订单给出的tm值分别为65.9和67.8(Tm (50mM Na+) )

做了温度梯度56-64
反应条件:35个循环  Takara  Taq酶   目的片段1600左右
                  94       5min
                  94        30s
                  56-64   30s
                  72        2min
                  72        10min
PCR跑胶结果如图,求大神指点

PCR求指点
jiaotu.jpg
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岁月静好
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Phoebe.Lee

主管区长

。。。

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

引用回帖:
11楼: Originally posted by xzy0425 at 2014-08-04 20:48:41
从图上看,非目的条带很多,且高度重复,你可以考虑引物的特异性方面,看看要不要换个引物;其次,由于目的条带为1600bp,适当将热变性及退火时间增加到40s、45s或1min;再考虑适当提高退火温度,摸索一下PCR参数条 ...

恩 谢谢
岁月静好
37楼2014-08-05 15:06:13
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查看全部 86 个回答

pzx1004

专家顾问


Phoebe.Lee(金币+1): 谢谢参与
祝福

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2014-08-04 17:07:02
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chyzm

专家顾问

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 应助指数-1, 无应助 2014-08-04 19:41:04
我不太懂,不是说回复就有金币么?
5楼2014-08-04 17:44:25
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aabuzhangjun

管理员

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

祝福,祈福,愿楼主今后一切顺利,愿自己及女朋友工作顺利,祈福!
6楼2014-08-04 17:54:54
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