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Phoebe.Lee

金虫 (小有名气)

。。。

[求助] PCR求指点 已有35人参与

自己设计的引物扩增基因编码区序列
上游引物:  CCGGAATTC ATGGCCGCGCAGCTGCTGGAGG                 
下游引物:CGCGTCGA CTCAGCTGAGCACCTCTTCCTGGGGC      
加了酶切位点和保护碱基   
引物合成订单给出的tm值分别为65.9和67.8(Tm (50mM Na+) )

做了温度梯度56-64
反应条件:35个循环  Takara  Taq酶   目的片段1600左右
                  94       5min
                  94        30s
                  56-64   30s
                  72        2min
                  72        10min
PCR跑胶结果如图,求大神指点

PCR求指点
jiaotu.jpg
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岁月静好
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xzy0425

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-08-05 12:57:03
从图上看,非目的条带很多,且高度重复,你可以考虑引物的特异性方面,看看要不要换个引物;其次,由于目的条带为1600bp,适当将热变性及退火时间增加到40s、45s或1min;再考虑适当提高退火温度,摸索一下PCR参数条件。
11楼2014-08-04 20:48:41
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