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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 愈创木酚法过氧化物酶测定的时候产生了很多气泡是否会干扰实验的测定？
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haven00

新虫 (初入文坛)

[求助] 愈创木酚法过氧化物酶测定的时候产生了很多气泡是否会干扰实验的测定？ 已有1人参与

分光光度法用愈创木酚测定蘑菇过氧化物酶，其中反应体系添加了3%的H2O2。在反应中发现比色皿里会生成非常多的气泡。这是正常的现象吗？？气泡会不会干扰实验的测定？
      
       在测定OD值的时候两分钟以内也保持着非常快的增长，但是在5min后可以观察到OD值会反反复复的突然往下降，然后再缓慢上升。依我观察下降的原因是一部分气泡消失了，因此我猜测会不会是气泡的原因造成了OD的迅速增加，而非产生了有色物质所致。
     
      现在我非常困惑，不知道大家做过氧化物酶的时候有没有遇到过这种产生很多气泡的情况，这种情况下测定出来的酶活力是不是误差非常大？有没有什么解决措施？请各位做酶的大虾们不吝赐教！！
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1楼 2014-08-04 11:17:34
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haven00

新虫 (初入文坛)
- =都没有人来回答吗
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2楼2014-08-05 13:36:47
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ashine

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
haven00: 金币+2, ★★★很有帮助 2014-08-06 15:47:15
youlinglyw: 金币+3, 赠人玫瑰手有余香，生物科学有你更精彩！ 2014-08-07 09:46:05
应该是H2O2加多了。我们的反应体系中50ml溶液中只加入19ul 30%H2O2，曲线的斜率就已经很显著，你加那么多H2O2，肯定会被酶催化产生很多气泡干扰光吸收。
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3楼2014-08-05 22:34:12
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haven00

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by ashine at 2014-08-05 22:34:12
应该是H2O2加多了。我们的反应体系中50ml溶液中只加入19ul 30%H2O2，曲线的斜率就已经很显著，你加那么多H2O2，肯定会被酶催化产生很多气泡干扰光吸收。

我们是在3ml反应体系中添加的0.3%H2O2 2ml，这样是不是有点多了？
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4楼2014-08-06 15:47:06
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ashine

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by haven00 at 2014-08-06 15:47:06
我们是在3ml反应体系中添加的0.3%H2O2 2ml，这样是不是有点多了？...

我们的体系与你们的相比较，相当于在3ml反应体系中只加入0.3% H2O2 0.114ml，所以你们的体系中H2O2就是多了！“反应液：取100mM pH7.0 磷酸缓冲液 50ml，边加热边加入愈创木酚28μl，搅拌溶解，待溶液冷却后加入30%的H2O2 19μl，混合均匀保存于冰箱中备用；测定时，取3ml反应液加入1ml含POD的提取液。”
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5楼2014-08-09 23:24:59
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ltt_1992

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by ashine at 2014-08-05 22:34:12
应该是H2O2加多了。我们的反应体系中50ml溶液中只加入19ul 30%H2O2，曲线的斜率就已经很显著，你加那么多H2O2，肯定会被酶催化产生很多气泡干扰光吸收。

我的反应体系跟你一样，但是也发现很多气泡而且没有颜色变化，请问你的有颜色变化吗
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6楼2015-06-02 16:32:10
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高亚楠六

铜虫 (初入文坛)
请问楼主你测定的具体方法是什么呀，要测几分钟

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7楼2015-10-26 14:23:43
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六只汤圆

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by ashine at 2014-08-09 23:24:59
我们的体系与你们的相比较，相当于在3ml反应体系中只加入0.3% H2O2 0.114ml，所以你们的体系中H2O2就是多了！“反应液：取100mM pH7.0 磷酸缓冲液 50ml，边加热边加入愈创木酚28μl，搅拌溶解，待溶液冷却后加入30 ...

这个体系看不出颜色变化啊
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不是人间富贵花
8楼2017-06-08 10:14:17
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