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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助PCR，着急中！
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clf0803

银虫 (正式写手)

[交流] 求助PCR，着急中！

各位高手们，我最近重复做以前的PCR，发现重复不出来。同样的体系和试剂，我做菌体PCR，菌体也是以前的同一批冷冻保藏的，请问可能是什么原因？前后时间间隔也就1个多月！另外，我用以前的PCR产物做模版也做不出来！
大家给我分析分析是什么原因阿？我的退火温度是50.5度，以前目的条带很亮的虽然有些杂带，但现在什么都没有，郁闷阿！好不容易才摸出来的条件，现在重复不出来！

[ Last edited by clf0803 on 2008-4-11 at 15:30 ]
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1楼 2008-04-08 21:43:57
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winter_gates

金虫 (正式写手)

生命过客
★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):谢谢分享,欢迎常来
首先看看你的酶是否失活（公用的酶进水失活是很正常的事情），其次看看你的菌体的量是否合适。菌体pcr并不是每次都可以做出来的，如果有产物，只要序列没有问题，就直接用产物pcr吧。
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For my life！
2楼2008-04-08 22:00:45
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clf0803

银虫 (正式写手)
那我现在该怎么办呢？酶应该没有问题，是刚买的
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3楼2008-04-08 22:03:45
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winter_gates

金虫 (正式写手)

生命过客
你以前的产物还有没有？
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For my life！
4楼2008-04-08 22:06:19
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clf0803

银虫 (正式写手)
我试过了，也没结果阿
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5楼2008-04-08 22:10:37
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winter_gates

金虫 (正式写手)

生命过客
？？产物都p不出来？，看看你的引物水解没有吧。
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For my life！
6楼2008-04-08 22:27:35
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dreamsail

银虫 (正式写手)
★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):积极交流奖
LZ自己检查下实验记录,体系里有没有少加东西~我有一次竟然忘记加DNTP.还有,不要心急
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7楼2008-04-10 20:14:22
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clf0803

银虫 (正式写手)
都急死我了，因为以前的产物做转化也不顺利，现在PCR又做不出来，今天又作了个温度梯度，不知道结果会怎么样！
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8楼2008-04-11 14:30:45
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clf0803

银虫 (正式写手)
刚做了检测，49-59度的梯度，我以前是在50.5出带，目的条带很亮但有杂带，但今天的结果很奇怪，不连续的在49.9，53.3，55.9，58.3出现条带，请问是什么原因阿？我下面做扩大该用哪个温度？
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9楼2008-04-11 15:29:15
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xxh8372

荣誉版主 (文坛精英)

小木虫微笑研究僧
引用回帖:
Originally posted by clf0803 at 2008-4-11 15:29:
刚做了检测，49-59度的梯度，我以前是在50.5出带，目的条带很亮但有杂带，但今天的结果很奇怪，不连续的在49.9，53.3，55.9，58.3出现条带，请问是什么原因阿？我下面做扩大该用哪个温度？

这个比较正常吧，那个好就用哪个咯
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____/\~~~/\,----(..)/\____//|(\|(^\/___\/\||__||__|-"
10楼2008-04-11 15:56:23
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