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clf0803

银虫 (正式写手)

[交流] 求助PCR,着急中!

各位高手们,我最近重复做以前的PCR,发现重复不出来。同样的体系和试剂,我做菌体PCR,菌体也是以前的同一批冷冻保藏的,请问可能是什么原因?前后时间间隔也就1个多月!另外,我用以前的PCR产物做模版也做不出来!
大家给我分析分析是什么原因阿?我的退火温度是50.5度,以前目的条带很亮的虽然有些杂带,但现在什么都没有,郁闷阿!好不容易才摸出来的条件,现在重复不出来!

[ Last edited by clf0803 on 2008-4-11 at 15:30 ]
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winter_gates

金虫 (正式写手)

生命过客

★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):谢谢分享,欢迎常来
首先看看你的酶是否失活(公用的酶进水失活是很正常的事情),其次看看你的菌体的量是否合适。菌体pcr并不是每次都可以做出来的,如果有产物,只要序列没有问题,就直接用产物pcr吧。
For my life!
2楼2008-04-08 22:00:45
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clf0803

银虫 (正式写手)

那我现在该怎么办呢?酶应该没有问题,是刚买的
3楼2008-04-08 22:03:45
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winter_gates

金虫 (正式写手)

生命过客

你以前的产物还有没有?
For my life!
4楼2008-04-08 22:06:19
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clf0803

银虫 (正式写手)

我试过了,也没结果阿
5楼2008-04-08 22:10:37
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winter_gates

金虫 (正式写手)

生命过客

??产物都p不出来?,看看你的引物水解没有吧。
For my life!
6楼2008-04-08 22:27:35
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dreamsail

银虫 (正式写手)

★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):积极交流奖
LZ自己检查下实验记录,体系里有没有少加东西~我有一次竟然忘记加DNTP.还有,不要心急
7楼2008-04-10 20:14:22
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clf0803

银虫 (正式写手)

都急死我了,因为以前的产物做转化也不顺利,现在PCR又做不出来,今天又作了个温度梯度,不知道结果会怎么样!
8楼2008-04-11 14:30:45
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clf0803

银虫 (正式写手)

刚做了检测,49-59度的梯度,我以前是在50.5出带,目的条带很亮但有杂带,但今天的结果很奇怪,不连续的在49.9,53.3,55.9,58.3出现条带,请问是什么原因阿?我下面做扩大该用哪个温度?
9楼2008-04-11 15:29:15
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xxh8372

荣誉版主 (文坛精英)

小木虫微笑研究僧

引用回帖:
Originally posted by clf0803 at 2008-4-11 15:29:
刚做了检测,49-59度的梯度,我以前是在50.5出带,目的条带很亮但有杂带,但今天的结果很奇怪,不连续的在49.9,53.3,55.9,58.3出现条带,请问是什么原因阿?我下面做扩大该用哪个温度?

这个比较正常吧,那个好就用哪个咯
____/\~~~/\,----(..)/\____//|(\|(^\/___\/\||__||__|-"
10楼2008-04-11 15:56:23
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