应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助PCR，着急中！
192/2返回列表上一页12
查看: 796  |  回复: 18
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

fairytale527

建议换个PCR仪
有过类似经历，昨天做的，今天就出不来了。换了个PCR仪做竟然好了，而且不止一次。原因不知道，反正试试吧。
赞一下 回复此楼
11楼2008-04-11 22:00:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fengyan

木虫 (小有名气)
以前用这个能行的话说明体系应该没多大问题吧
退火温度有个计算公式Tm=4(G+c)+2(A+T),一般在45～55度,温度低容易退火但特异性低;温度高,不容易退火但特异性高。
可以再计算一下你的试试看！
赞一下 回复此楼
12楼2008-04-12 08:46:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

clf0803

银虫 (正式写手)
又做不出来了！好郁闷阿！大家有没有类似的经历阿，都怎么解决的 阿？我确定试剂都没问题阿，因为中间做出来过一次！
赞一下 回复此楼
13楼2008-04-17 08:36:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yangjian8411

我这几天也是在做PCR，是鹅掌楸的，我使用的是Touchdown策略，来P的。前一段时间还好，这两天不知道为什么跑出来的条带特别淡，哪位大虾帮忙分析一下原因撒
赞一下 回复此楼
14楼2008-04-17 09:23:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

刺客616

金虫 (正式写手)
把你原来的试剂全部换成新的，模板也用新的，分子实验说不清楚会怎么样，你用新体系和旧体系来做对照实验，看是不是会有问题。因为有的时候，DNA降解的也很快，过一夜也许就不能用了。
赞一下 回复此楼
刺客——用一生的时间熟悉一只枪。
15楼2008-04-17 09:41:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

再见苏摩

银虫 (初入文坛)
做PCR最好还是用质粒吧，菌体很容易出杂带，而且保存了1个月的菌....

你有时候做出来了，有时候做不出，很可能出来的就不是你要的，只是假阳性

[ Last edited by 再见苏摩 on 2008-4-17 at 10:58 ]
赞一下 回复此楼
16楼2008-04-17 10:57:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rinp

木虫 (正式写手)
你要排除体系问题应该做阳性对照的啊
至于温度梯度应该取最亮的那个，如果差不多就取52到55左右的呗，这个比较常用
赞一下 回复此楼
海到无边天做岸山登绝顶我为峰.博士学位就是鞋里的一粒米，不拿不舒服，拿了不能吃！
17楼2008-04-17 14:01:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

winter_gates

金虫 (正式写手)

生命过客
PCR反应结束后，看看总体积变没有变，如果有变则可能是因为PCR仪器的顶盖加热有点问题，可能会导致P不出来。还有别人的PCR结果怎么样？看看PCR的温控有没有问题。
赞一下 回复此楼
For my life！
18楼2008-04-17 16:30:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Kiddy

金虫 (小有名气)
先做个预试验，确定自己用的试剂没问题，再开始试验，这样有针对性一些。你所谓的菌体是活化后的菌液还是单克隆？小摇一些，然后做菌液PCR吧
赞一下 回复此楼
19楼2008-04-17 16:47:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 clf0803 的主题更新
192/2返回列表上一页12
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 6/300 2026-11-05 18:11 by My20PsvIExYO
[考博] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 6/300 2026-11-05 18:00 by My20PsvIExYO
[考研] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 11/550 2026-11-05 17:58 by My20PsvIExYO
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 7/350 2026-11-05 17:58 by My20PsvIExYO
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 kvewwGtKktqB 2026-11-04 8/400 2026-11-05 17:47 by My20PsvIExYO
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 kvewwGtKktqB 2026-11-04 11/550 2026-11-05 17:47 by My20PsvIExYO
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +5 kvewwGtKktqB 2026-11-04 13/650 2026-11-05 17:47 by My20PsvIExYO
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +5 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 8/400 2026-11-05 17:38 by My20PsvIExYO
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 14/700 2026-11-05 17:36 by My20PsvIExYO
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +5 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 10/500 2026-11-05 17:36 by My20PsvIExYO
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 11/550 2026-11-05 17:36 by My20PsvIExYO
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 9/450 2026-11-05 17:26 by My20PsvIExYO
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 9/450 2026-11-05 17:25 by My20PsvIExYO
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +6 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 16/800 2026-11-05 17:25 by My20PsvIExYO
[基金申请] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 7/350 2026-11-05 16:08 by My20PsvIExYO
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 7/350 2026-11-05 16:08 by My20PsvIExYO
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 9/450 2026-11-05 15:46 by My20PsvIExYO
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 hNpp4Y2CGvSC 2026-11-04 10/500 2026-11-05 15:35 by My20PsvIExYO
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 10/500 2026-11-05 15:24 by My20PsvIExYO
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 9/450 2026-11-05 15:13 by My20PsvIExYO
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭