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fairytale527

建议换个PCR仪
有过类似经历,昨天做的,今天就出不来了。换了个PCR仪做竟然好了,而且不止一次。原因不知道,反正试试吧。
11楼2008-04-11 22:00:15
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fengyan

木虫 (小有名气)

以前用这个能行的话说明体系应该没多大问题吧
退火温度有个计算公式Tm=4(G+c)+2(A+T),一般在45~55度,温度低容易退火但特异性低;温度高,不容易退火但特异性高。
可以再计算一下你的试试看!
12楼2008-04-12 08:46:42
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clf0803

银虫 (正式写手)

又做不出来了!好郁闷阿!大家有没有类似的经历阿,都怎么解决的 阿?我确定试剂都没问题阿,因为中间做出来过一次!
13楼2008-04-17 08:36:26
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yangjian8411

我这几天也是在做PCR,是鹅掌楸的,我使用的是Touchdown策略,来P的。前一段时间还好,这两天不知道为什么跑出来的条带特别淡,哪位大虾帮忙分析一下原因撒
14楼2008-04-17 09:23:33
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刺客616

金虫 (正式写手)

把你原来的试剂全部换成新的,模板也用新的,分子实验说不清楚会怎么样,你用新体系和旧体系来做对照实验,看是不是会有问题。因为有的时候,DNA降解的也很快,过一夜也许就不能用了。
刺客——用一生的时间熟悉一只枪。
15楼2008-04-17 09:41:05
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再见苏摩

银虫 (初入文坛)

做PCR最好还是用质粒吧,菌体很容易出杂带,而且保存了1个月的菌....

你有时候做出来了,有时候做不出,很可能出来的就不是你要的,只是假阳性

[ Last edited by 再见苏摩 on 2008-4-17 at 10:58 ]
16楼2008-04-17 10:57:11
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rinp

木虫 (正式写手)

你要排除体系问题应该做阳性对照的啊
至于温度梯度应该取最亮的那个,如果差不多就取52到55左右的呗,这个比较常用
海到无边天做岸山登绝顶我为峰.博士学位就是鞋里的一粒米,不拿不舒服,拿了不能吃!
17楼2008-04-17 14:01:56
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winter_gates

金虫 (正式写手)

生命过客

PCR反应结束后,看看总体积变没有变,如果有变则可能是因为PCR仪器的顶盖加热有点问题,可能会导致P不出来。还有别人的PCR结果怎么样?看看PCR的温控有没有问题。
For my life!
18楼2008-04-17 16:30:31
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Kiddy

金虫 (小有名气)

先做个预试验,确定自己用的试剂没问题,再开始试验,这样有针对性一些。你所谓的菌体是活化后的菌液还是单克隆?小摇一些,然后做菌液PCR吧
19楼2008-04-17 16:47:40
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