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monster_zeh

金虫 (小有名气)

[求助] 多糖分子量测定 已有2人参与

请问多糖的分子量测定为什么用HPLC凝胶色谱柱做标准曲线的方法测?而不是直接像小分子天然产物直接用做MS呢?谢谢大家。
文献中一般用的是如下的方法:
采用高效液相色谱仪(HPLC)和凝胶色谱柱对松塔多糖进行分子量测定
和纯度鉴定。
(1) 标准曲线绘制:用分子量为 106、194、620、1470、4120、11840、25820、
58400、124700、460000、965000、1250450 的葡聚糖制作分子量标准曲线。
(2) 样品测定:取适量干燥松塔多糖样品,溶解于超纯水中,配置成浓度为
1 mg/mL 的糖液。用水系微孔滤膜过滤后上机测定。
(3) HPLC 条件:采用凝胶色谱柱(GPC)和示差折光检测器(RID)。柱温
为 25℃,检测器温度为 25℃。流动相为超纯水,流速 1.0  mL/min,进样量为
50 μL。
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jytryh

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
xiaoxiao270: 金币+1, 3Q 2014-08-02 20:02:51
monster_zeh: 金币+5 2014-08-02 21:23:13
用MS是不能测定多糖的分子量的,你想想,首先多糖并不是单一分子的纯化合物,其次多糖分子复杂,分子量大,他也得不到分子离子峰啊
中医药是中华民族一颗璀璨的明珠
3楼2014-08-02 10:25:17
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shisshan1978

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
xiaoxiao270: 金币+1, 3Q 2014-08-02 20:02:44
monster_zeh: 金币+5 2014-08-02 21:23:09
多糖的分子量具有微观不均一性,就是有分子量相近但是不同分子量大小的多糖组成;另外多糖分子量很大,能直接测那么大分子量物质的质谱方法还不具备;多糖分子量测定最准确的方法是多角度激光散射法
2楼2014-08-02 10:15:23
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torekill

铁杆木虫 (著名写手)

粗多糖中有很多组分,要通过柱层析来获得均一组分,然后才去测分子量
4楼2014-08-03 22:21:21
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