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ivyvampire

新虫 (正式写手)

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[求助] 定点突变未扩增出条带，求大神指导？已有1人参与

如题，试剂盒是life的点突变试剂盒，已做过多个克隆
这次的质粒比之前的质粒还略小一点
带上了试剂盒的质控，结果质控正常扩增出片段，我的质粒未扩增出来
引物参照说明书设计的，完全互补了，不知道是否会形成引物二聚体，扩不出来？
有同学遇到同样情况的么？

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1楼 2014-07-30 10:47:26

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

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至尊木虫 (知名作家)

Translator and Proofreader

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【答案】应助回帖

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ivyvampire(kx444555代发): 金币+3, 鼓励交流 2014-07-30 11:22:54
ivyvampire: 金币+5, ★★★★★最佳答案 2014-08-04 10:58:22

估计主要是引物的问题：
1、引物中有几个突变点;
2、引物Tm值（很重要）；
3、引物长度。

另外，就是扩增时的退火温度（与引物Tm相关）、延伸时间、循环数等参数。当然质粒模板需要正确。

对了，你是说你只在agarose胶上看了扩增产物而未做transformation？做点突变是扩增循环数很少，不见得看到多少产物，只要有转化子就可以了。

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