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酶活性测定 已有1人参与
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我要测C-S lyase酶活性，文献里说：细胞破碎时，加入无菌玻璃珠然后漩涡，这个漩涡是指漩涡振荡器吗？ 酶反应液：Reaction mixtures[containing 0.2 mM 5,5′-dithiobis (2-nitrobenzoic acid)] (DTNB),100 μM PLP, 4 mM substrate, CFEs (approximately 30 μg protein)in 100 mM potassium phosphate (pH 7.5) solution]也没说反应液体积。那我应该按多少配啊？（如果我体积少了，酶粗提取液30微克，那底物不就不够了吗？会影响酶的活性吧）  |
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yunshenglmm
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【答案】应助回帖
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最近也在做酵母体外酶活测定，看资料酵母应该重悬在裂解缓冲液中，加等倍glassbeads，涡旋。有一种裂解缓冲液应该适合： Breaking Buffer 50 mM sodium phosphate, pH 7.4 1 mM PMSF (phenylmethylsulfonyl fluoride or other protease inhibitors) 1 mM EDTA 5% glycerol 1. Prepare a stock solution of your desired protease inhibitors and store appropriately. Follow manufacturer's recommendations. 2. For 1 liter, dissolve in 900 ml deionized water: 6 g sodium phosphate (monobasic), 372 mg EDTA, and 50 ml glycerol 3. Use NaOH to adjust pH and bring up the volume to 1 liter. Store at 4°C. 4. Right before use, add the protease inhibitors. |
2楼2014-08-02 14:11:52