| 查看: 577 | 回复: 1 | ||
[求助]
酶活性测定 已有1人参与
|
|
我要测C-S lyase酶活性，文献里说：细胞破碎时，加入无菌玻璃珠然后漩涡，这个漩涡是指漩涡振荡器吗？ 酶反应液：Reaction mixtures[containing 0.2 mM 5,5′-dithiobis (2-nitrobenzoic acid)] (DTNB),100 μM PLP, 4 mM substrate, CFEs (approximately 30 μg protein)in 100 mM potassium phosphate (pH 7.5) solution]也没说反应液体积。那我应该按多少配啊？（如果我体积少了，酶粗提取液30微克，那底物不就不够了吗？会影响酶的活性吧）  |
回复此楼» 猜你喜欢
估计是周四
已经有3人回复
-
基金啊基金
已经有3人回复
-
科研孤儿太难了
已经有15人回复
-
让我中一个面上吧！
已经有10人回复
-
言之凿凿，明天官网会通知放榜？
已经有17人回复
-
时间戳又变了
已经有17人回复
-
今天系统多次维护，明天很可能放榜！
已经有11人回复
-
时间戳变了，能看出什么问题？
已经有23人回复
-
只有每年这种时候来逛逛小木虫
已经有22人回复
-
放榜前的不淡定
已经有12人回复
yunshenglmm
铜虫 (小有名气)
- 应助: 11 (小学生)
- 金币: 128.1
- 散金: 40
- 红花: 1
- 帖子: 288
- 在线: 68.8小时
- 虫号: 450868
- 注册: 2007-11-04
- 性别: GG
- 专业: 植物生理与生化
【答案】应助回帖
|
最近也在做酵母体外酶活测定，看资料酵母应该重悬在裂解缓冲液中，加等倍glassbeads，涡旋。有一种裂解缓冲液应该适合： Breaking Buffer 50 mM sodium phosphate, pH 7.4 1 mM PMSF (phenylmethylsulfonyl fluoride or other protease inhibitors) 1 mM EDTA 5% glycerol 1. Prepare a stock solution of your desired protease inhibitors and store appropriately. Follow manufacturer's recommendations. 2. For 1 liter, dissolve in 900 ml deionized water: 6 g sodium phosphate (monobasic), 372 mg EDTA, and 50 ml glycerol 3. Use NaOH to adjust pH and bring up the volume to 1 liter. Store at 4°C. 4. Right before use, add the protease inhibitors. |
2楼2014-08-02 14:11:52
40