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huxi_8

至尊木虫 (著名写手)

[求助] 抗体制备 已有1人参与

我原核表达了两个蛋白，并免疫兔制备了多抗，这两个蛋白只有10个AA的差异，如何处理多抗使得他们分别只能识别各自的蛋白，而不再发生交叉反应。哪位大侠有这方面的经验，请分享一下，多谢啦！
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huxi
1楼 2014-07-28 22:22:47
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huxi_8

至尊木虫 (著名写手)
用原核表达的A蛋白和B蛋白抗血清反应沉淀交叉反应的抗体，离心分离沉淀，上清就只剩下抗B蛋白与A蛋白不同决定簇的多抗，反之，就可以得到抗A蛋白与B蛋白不同的决定簇的多抗，这样可行吗？
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huxi
3楼2014-07-30 09:17:26
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wolfman840

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你可以在纯化多抗时，加入目的蛋白交联两根亲和柱，也许能进行初步分离。
或者你就单独用一个蛋白免疫一个种属的兔子，另一个蛋白免疫另一个种属的兔子，制备后用亲和柱子分别处理血清试试。
在做检测方法验证时加入系统适用性检验来确定是否有交叉反应。如果还有，那说明两个蛋白的位点确实很像，需要利用基因工程的方法进行改造了。
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2楼2014-07-29 08:31:33
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