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huxi_8

至尊木虫 (著名写手)

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专业: 生物物理、生物化学与分子

[求助] 抗体制备已有1人参与

我原核表达了两个蛋白，并免疫兔制备了多抗，这两个蛋白只有10个AA的差异，如何处理多抗使得他们分别只能识别各自的蛋白，而不再发生交叉反应。哪位大侠有这方面的经验，请分享一下，多谢啦！

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huxi

1楼 2014-07-28 22:22:47

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

wolfman840

木虫 (正式写手)

BioEPI: 2
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性别: GG
专业: 生物技术药物

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

你可以在纯化多抗时，加入目的蛋白交联两根亲和柱，也许能进行初步分离。
或者你就单独用一个蛋白免疫一个种属的兔子，另一个蛋白免疫另一个种属的兔子，制备后用亲和柱子分别处理血清试试。
在做检测方法验证时加入系统适用性检验来确定是否有交叉反应。如果还有，那说明两个蛋白的位点确实很像，需要利用基因工程的方法进行改造了。