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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 最近做荧光定量PCR总是阴性有扩增
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aini_222925

金虫 (初入文坛)

[求助] 最近做荧光定量PCR总是阴性有扩增 已有1人参与

最近做荧光定量PCR总是阴性有扩增，阴性对照的模板是水，目前引物也换了，水也换了，枪也洗了，反应体系也换了，还是有扩增，天哪，问题到底出在哪，求大神指点迷津啊！
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我是疯子我怕谁
1楼 2014-07-28 16:10:02
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gniy

金虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
PCR管也顺便换一下呗。
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2楼2014-07-28 16:21:18
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主
荧光定量PCR总是阴性有扩增，这里的描述不清楚，阴性的表观Ct值是多少，还有PCR扩增产物做溶解曲线了吗？产物跑胶分析了吗？
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
3楼2014-07-28 16:24:20
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aini_222925

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gniy at 2014-07-28 16:21:18
PCR管也顺便换一下呗。

恩，换过了。
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我是疯子我怕谁
4楼2014-07-28 16:42:07
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aini_222925

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by gyesang at 2014-07-28 16:24:20
荧光定量PCR总是阴性有扩增，这里的描述不清楚，阴性的表观Ct值是多少，还有PCR扩增产物做溶解曲线了吗？产物跑胶分析了吗？

阴性Ct值在32左右，跟产物溶解度曲线TM值相同，没有跑胶。
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我是疯子我怕谁
5楼2014-07-28 16:44:04
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主
引用回帖:
5楼: Originally posted by aini_222925 at 2014-07-28 16:44:04
阴性Ct值在32左右，跟产物溶解度曲线TM值相同，没有跑胶。...

能否把溶解曲线的图上传上来看一下啊
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
6楼2014-07-28 16:52:20
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风灵之翼

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by aini_222925 at 2014-07-28 16:44:04
阴性Ct值在32左右，跟产物溶解度曲线TM值相同，没有跑胶。...

一般30以上都认为是没有模板，你这可能存在引物自连然后扩增的，定量中如果30个循环才有结果可以认为是较好的结果

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7楼2014-07-29 01:22:01
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