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aini_222925

金虫 (初入文坛)

[求助] 最近做荧光定量PCR总是阴性有扩增 已有1人参与

最近做荧光定量PCR总是阴性有扩增,阴性对照的模板是水,目前引物也换了,水也换了,枪也洗了,反应体系也换了,还是有扩增,天哪,问题到底出在哪,求大神指点迷津啊!
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我是疯子我怕谁
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gniy

金虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
PCR管也顺便换一下呗。
2楼2014-07-28 16:21:18
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gyesang

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荧光定量PCR总是阴性有扩增,这里的描述不清楚,阴性的表观Ct值是多少,还有PCR扩增产物做溶解曲线了吗?产物跑胶分析了吗?
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
3楼2014-07-28 16:24:20
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aini_222925

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by gniy at 2014-07-28 16:21:18
PCR管也顺便换一下呗。

恩,换过了。
我是疯子我怕谁
4楼2014-07-28 16:42:07
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aini_222925

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by gyesang at 2014-07-28 16:24:20
荧光定量PCR总是阴性有扩增,这里的描述不清楚,阴性的表观Ct值是多少,还有PCR扩增产物做溶解曲线了吗?产物跑胶分析了吗?

阴性Ct值在32左右,跟产物溶解度曲线TM值相同,没有跑胶。
我是疯子我怕谁
5楼2014-07-28 16:44:04
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

引用回帖:
5楼: Originally posted by aini_222925 at 2014-07-28 16:44:04
阴性Ct值在32左右,跟产物溶解度曲线TM值相同,没有跑胶。...

能否把溶解曲线的图上传上来看一下啊
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
6楼2014-07-28 16:52:20
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风灵之翼

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by aini_222925 at 2014-07-28 16:44:04
阴性Ct值在32左右,跟产物溶解度曲线TM值相同,没有跑胶。...

一般30以上都认为是没有模板,你这可能存在引物自连然后扩增的,定量中如果30个循环才有结果可以认为是较好的结果

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7楼2014-07-29 01:22:01
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