24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 176  |  回复: 8
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

clf0803

银虫 (正式写手)

[交流] 求助关于转化

各位高手,我目前正在做双酶切连接和转化。我用的的酶是takara的NdeI和HindIII,采用37度Kbuffer中双酶切6h,16度连接过夜,转化后涂amp板,可是却长出了一大片(非单菌落),空白对照也长出一片,以致不知如何检测!以前我做转化时都长少量的单菌落,这次不知问题出在哪里?
      还有,请问各位在做转化时,质粒和DNA的比例一般是多少啊?我的DNA基因为1.5kbp,质粒5.4kbp。


      谢谢大家!
回复此楼

» 猜你喜欢

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

clf0803

银虫 (正式写手)

再问一下,酶切之后,以及连接后需要纯化回收吗?20微升的体系,怎么回收阿?
6楼2008-04-07 19:26:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

long0553299

不知道你的培养的抗生素可失效了.
还有可能是你的酶切没切好,建议做两个单酶切的鉴定,确保你的载体可以切开.
质粒和DNA的胶回收产物的比例要根据你的回收产物的浓度定,正常情况下,15ul体系中质粒2ul,DNA5ul就可以了,基本没有失败过!
不知对你是否有用!
2楼2008-04-07 14:01:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

weiwei1

木虫 (小有名气)

是不是酶切不完全?一般DNA基因:质粒=5~10:1就可以,摩尔浓度。
3楼2008-04-07 15:24:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

克隆大虾

铁杆木虫 (著名写手)

1抗生素可能坏掉了
2 下次涂板多做几个梯度。
4楼2008-04-07 17:46:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 291求调剂 +4 Y-cap 2026-03-29 4/200 2026-03-29 10:16 by lbsjt
[考研] 311求调剂 +5 冬十三 2026-03-24 5/250 2026-03-29 08:55 by qingfeng258
[考研] 一志愿华东师范大学有机化学专业,初试351分,复试被刷求调剂! +3 真名有冰 2026-03-29 4/200 2026-03-29 08:47 by qingfeng258
[考研] 298求调剂 +4 种圣赐 2026-03-28 4/200 2026-03-29 08:42 by q1092522407
[考研] 291求调剂 +4 Y-cap 2026-03-29 5/250 2026-03-29 08:08 by 无际的草原
[考研] 0703化学 +11 妮妮ninicgb 2026-03-27 11/550 2026-03-29 06:45 by 544594351
[考研] 329求调剂 +7 星野? 2026-03-26 7/350 2026-03-29 06:43 by 544594351
[考研] 266分,求材料冶金能源化工等调剂 +7 哇呼哼呼哼 2026-03-27 9/450 2026-03-28 12:22 by zllcz
[考研] 085701环境工程,267求调剂 +16 minht 2026-03-26 16/800 2026-03-28 12:16 by zllcz
[考研] 311求调剂 +3 希望上岸阿小杨 2026-03-23 3/150 2026-03-28 07:57 by 热情沙漠
[考研] 283求调剂(080500) +4 A child 2026-03-27 4/200 2026-03-27 15:34 by XPU李庆
[考研] 359求调剂 +4 王了个楠 2026-03-25 4/200 2026-03-27 08:43 by 不吃魚的貓
[考研] 333求调剂 +6 wfh030413@ 2026-03-23 6/300 2026-03-26 22:45 by 学员8dgXkO
[考研] 263求调剂 +6 yqdszhdap- 2026-03-22 10/500 2026-03-26 13:11 by 公瑾逍遥
[考研] 化学调剂一志愿上海交通大学336分-本科上海211 +4 小鱼爱有机 2026-03-25 4/200 2026-03-26 10:19 by aa331100
[考研] 303求调剂 +6 蓝山月 2026-03-25 6/300 2026-03-25 22:47 by 418490947
[考研] 机械学硕总分317求调剂!!!! +4 Acaciad 2026-03-25 4/200 2026-03-25 19:59 by hanserlol
[考研] 调剂 +4 13853210211 2026-03-24 4/200 2026-03-24 19:44 by ms629
[考研] 335求调剂 +4 yuyu宇 2026-03-23 5/250 2026-03-23 23:49 by Txy@872106
[论文投稿] 急发核心期刊论文 +3 贤达问津 2026-03-23 5/250 2026-03-23 17:13 by 妹子不好惹
信息提示
请填处理意见