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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » lentivirus 系统 过表达蛋白-感染MEF细胞多久后做二次感染合适？
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jessie06

木虫 (正式写手)

[交流] lentivirus 系统 过表达蛋白-感染MEF细胞多久后做二次感染合适？

刚开始用lentivirus系统过表达蛋白，一10cm盘293T细胞收的病毒浓缩后感染了6孔板一个孔的MEF细胞，感染时密度20%左右，感染后48小时都没有看到荧光，不正常吧？不知道是什么问题（依据实验室师姐之前的经验来的，没有测滴度），所以准备拿冻存的病毒重新感染MEF细胞，并打算做连续感染，但不知道什么时候做二次感染合适？一次感染后24小时内？求各位大神指导。
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1楼 2014-07-26 17:25:06
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yuanyeguhong

至尊木虫 (文坛精英)
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7楼2014-07-26 17:34:23
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yuanyeguhong

至尊木虫 (文坛精英)
★
jessie06(金币+1): 谢谢参与
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8楼2014-07-26 17:34:39
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usky_4

银虫 (小有名气)
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jessie06: 金币+2 2014-07-26 18:04:17
48小时候还没有看到荧光的确不太正常，不过MEF的确比较难感染。如果要做二次感染的话，24小时重复一次就可以。比如你可以今天做一次感染，明天再做一次感染。当然别忘了加感染用的试剂。
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12楼2014-07-26 17:46:32
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jessie06

木虫 (正式写手)
引用回帖:
12楼: Originally posted by usky_4 at 2014-07-26 17:46:32
48小时候还没有看到荧光的确不太正常，不过MEF的确比较难感染。如果要做二次感染的话，24小时重复一次就可以。比如你可以今天做一次感染，明天再做一次感染。当然别忘了加感染用的试剂。

嗯 我看到有说慢病毒表达时间较慢，荧光表达时间较长，所以有建议说96小时后检测荧光的？试剂您指polybrene吗？
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19楼2014-07-26 18:06:28
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usky_4

银虫 (小有名气)
★
jessie06(金币+1): 谢谢参与
引用回帖:
19楼: Originally posted by jessie06 at 2014-07-26 18:06:28
嗯 我看到有说慢病毒表达时间较慢，荧光表达时间较长，所以有建议说96小时后检测荧光的？试剂您指polybrene吗？...

恩对。一般48小时应该是可以看到荧光的，可能会比较少，完全没有应该不太可能。你是用显微镜还是用流式？如果还是看不到的话就放着多等两天也不碍事
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25楼2014-07-26 18:12:32
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wentao490

金虫 (著名写手)
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28楼2014-07-26 18:16:38
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邴绍所

至尊木虫 (文坛精英)
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37楼2014-07-26 18:18:33
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邴绍所

至尊木虫 (文坛精英)
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38楼2014-07-26 18:18:41
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SCI-ICS2楼
2014-07-26 17:29   回复  
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chennadm3楼
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pzx10044楼
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pzx10045楼
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dmbb6楼
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wangyang78879楼
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tzynew11楼
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cxjzly200813楼
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49939723215楼
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kiss2008553716楼
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