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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » 蛋白质过高效液相色谱的相关问题
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guyifei2007

木虫 (小有名气)

[交流] 蛋白质过高效液相色谱的相关问题

最近小弟在做组蛋白的含量分析，用的是0.1%TFA的水和0.1%TFA的乙腈做为流动相，柱子是C18柱，检测波长210或278，但是就是没有出峰，求这方面得大神给予几个可行的方案或是流动相的比例
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1楼 2014-07-26 09:38:25
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guyifei2007

木虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by Dionysius at 2014-07-31 08:36:49
你要看一下你的柱子孔径，蛋白最好选用300Å的。分子量10K左右的小蛋白可以用C18，分子量大的蛋白还是用C4或者C8吧...

我现在用的是一万多的蛋白 ，可以用C18码
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13楼2014-08-01 20:59:05
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chenzhengyi

木虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
suruiqin: 金币+2, 感谢参与，欢迎常来分析版交流~ 2014-07-29 11:27:38
要用专用柱子，例如：Aeris WIDEPORE XB-C18色谱柱(4.6 mmi.d ×250 mm，粒径3.6 μm)；而且检测波长一般是214,254；另外你要给出流速和梯度啊！
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有阳光的地方就会有阴影
2楼2014-07-26 11:49:32
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guyifei2007

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by chenzhengyi at 2014-07-26 11:49:32
要用专用柱子，例如：Aeris WIDEPORE XB-C18色谱柱(4.6 mmi.d ×250 mm，粒径3.6 μm)；而且检测波长一般是214,254；另外你要给出流速和梯度啊！

我没有用专门的柱子流速我用的0.5ml/min和1ml/min，现在我还处于摸索条件阶段，都是根据相关文献来的，但是我一上高效液相色谱就只能看到基线，别的什么多不能看到，所以现在我仅想问问那些做过蛋白质高效液相色谱的，他们做实验的一般条件，谢谢拉。
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3楼2014-07-26 14:52:09
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chenzhengyi

木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by guyifei2007 at 2014-07-26 14:52:09
我没有用专门的柱子流速我用的0.5ml/min和1ml/min，现在我还处于摸索条件阶段，都是根据相关文献来的，但是我一上高效液相色谱就只能看到基线，别的什么多不能看到，所以现在我仅想问问那些做过蛋白质高效液相色谱 ...

很简单的，流动相B(0.1%TFA乙腈)从5%-90%，时间40min，你告诉我一下你的柱子。型号，长度，填充物信息等。估计你的柱子粒径是不是太小了？不出峰？或者你试着加大样品浓度或者加大进样量
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有阳光的地方就会有阴影
4楼2014-07-29 10:52:14
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