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hajierlove

铜虫 (正式写手)

[求助] 菌液pcr有结果,酶切没有,一定是假阳性吗? 已有7人参与

菌液pcr有亮亮的目的条带(用的M13通用引物),提质粒,浓度100左右,酶切过夜,没有目的条带,一定是假阳性吗?若送出去测序,是不是有点浪费?
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踏实
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hajierlove

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
18楼: Originally posted by happydove at 2014-08-06 15:46:02
通用引物PCR其实很不准,建议你用一头通用,一头特异引物,扩增看看。
送测序可以,问题是载体序列的话,也是要收费的。
如果做酶切,质粒浓度得有保证。也可以换酶切一下看看。

之前通用引物p出来的,测序基本没问题,现在表达载体,p出来有条带的,基本上测序都不正确
踏实
20楼2014-10-31 19:47:19
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geshujuan

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
hajierlove(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-07-24 09:33:53
换新的电泳缓冲液,我之前也遇到过这种情况,换过电泳缓冲液就可以跑出带了!祝你实验顺利!
我一定可以做的更好!!
2楼2014-07-23 16:59:01
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hajierlove

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by geshujuan at 2014-07-23 16:59:01
换新的电泳缓冲液,我之前也遇到过这种情况,换过电泳缓冲液就可以跑出带了!祝你实验顺利!

嗯嗯,好的,我试试

[ 发自小木虫客户端 ]
踏实
3楼2014-07-23 17:25:33
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luwei13566

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
hajierlove(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-07-24 09:34:04
菌落PCR既然有非常特异的亮带,扩增条带大小和你的理论值一致的话就直接测序吧
大家相互帮助哈
4楼2014-07-23 19:21:43
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