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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 菌液pcr有结果，酶切没有，一定是假阳性吗？
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hajierlove

铜虫 (正式写手)

[求助] 菌液pcr有结果，酶切没有，一定是假阳性吗？ 已有7人参与

菌液pcr有亮亮的目的条带（用的M13通用引物），提质粒，浓度100左右，酶切过夜，没有目的条带，一定是假阳性吗？若送出去测序，是不是有点浪费？
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踏实
1楼 2014-07-23 15:16:58
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hajierlove

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
18楼: Originally posted by happydove at 2014-08-06 15:46:02
通用引物PCR其实很不准，建议你用一头通用，一头特异引物，扩增看看。
送测序可以，问题是载体序列的话，也是要收费的。
如果做酶切，质粒浓度得有保证。也可以换酶切一下看看。

之前通用引物p出来的，测序基本没问题，现在表达载体，p出来有条带的，基本上测序都不正确
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踏实
20楼2014-10-31 19:47:19
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geshujuan

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
hajierlove(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-07-24 09:33:53
换新的电泳缓冲液，我之前也遇到过这种情况，换过电泳缓冲液就可以跑出带了！祝你实验顺利！
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我一定可以做的更好！！
2楼2014-07-23 16:59:01
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hajierlove

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by geshujuan at 2014-07-23 16:59:01
换新的电泳缓冲液，我之前也遇到过这种情况，换过电泳缓冲液就可以跑出带了！祝你实验顺利！

嗯嗯，好的，我试试

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踏实
3楼2014-07-23 17:25:33
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luwei13566

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
hajierlove(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-07-24 09:34:04
菌落PCR既然有非常特异的亮带，扩增条带大小和你的理论值一致的话就直接测序吧
赞一下 回复此楼
大家相互帮助哈
4楼2014-07-23 19:21:43
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