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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » RAW264.7复苏细胞不贴壁 生长缓慢是怎么回事？
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一旺百旺

新虫 (著名写手)
首先看看细胞密度，包括没有贴壁的，大概知道你冻存的时候是不是细胞密度太低。如果太低状态不好也正常，细胞生长有一定的密度，要不生长很慢。到最后细胞状态可能也不会太好。复苏大约五个小时以后就要看看细胞状态，该加血清加血清，该换液就换液。很大程度上你冻的时候没有冻好，比如消化的时间不对，还有复苏的时候离心转速，还有复苏的时候可以用培养液离心两次来清洗。

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11楼2014-07-25 10:08:59
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张李云

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 那个 at 2014-07-23 12:44:09
慢慢等一下吧
只要没染菌，慢慢养着吧，就别老折腾它们了。

同意，前一阵子，我养的Raw 264.7的时候也遇到同样的问题，稀疏，生长缓慢，都想放弃了，于是有四五天没管他们，结果反而长满了。柳暗花明的感觉。
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科研之路不平坦……
12楼2014-07-25 10:51:44
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W格子

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by ssssllllnnnn at 2014-07-25 09:48:24
细胞冻存效果不好，大部分细胞不能复苏。少量细胞存活需要时间慢慢长起来，耐心等待吧。应该没有什么问题。

至于冻存细胞，我这里非常简单：用含10% DMSO全血清冻存，也不需要逐步降温的复杂过程，就是把细胞放在 ...

谢谢你，又给了我点儿信心~
我现在也不知道是哪里出了问题，下次冻存的时候试试你的冻存液。不过没有什么特制的冻存盒，不知道您讲的是个什么样的盒子。直接放泡沫盒吧。
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13楼2014-07-25 12:53:25
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W格子

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by zszhxmc at 2014-07-25 09:52:48
关于RAW264.7我之前培养的时候确实碰到这个问题，如果传代密度低的话，这个细胞的生长状态就不太好！...

原来大家也遇到过类似的问题，那我再等等吧，希望能长起来
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14楼2014-07-25 12:55:00
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W格子

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
11楼: Originally posted by 一旺百旺 at 2014-07-25 10:08:59
首先看看细胞密度，包括没有贴壁的，大概知道你冻存的时候是不是细胞密度太低。如果太低状态不好也正常，细胞生长有一定的密度，要不生长很慢。到最后细胞状态可能也不会太好。复苏大约五个小时以后就要看看细胞状态 ...

好的。谢谢建议，下次做的时候特别注意一下。
因为这个细胞有时候特别不好消化，可能我上次冻存前消化的时间长了（至少3min），虽然细胞浓度挺高的但细胞状态可能已经不好了。
细胞房那个就离心机转速有点不稳定了，是不是也有影响啊？会有机械损伤？
复苏的洗两次，是要洗去DMSO吗？它的影响特别大吗？
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15楼2014-07-25 13:02:36
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W格子

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
12楼: Originally posted by 张李云 at 2014-07-25 10:51:44
同意，前一阵子，我养的Raw 264.7的时候也遇到同样的问题，稀疏，生长缓慢，都想放弃了，于是有四五天没管他们，结果反而长满了。柳暗花明的感觉。...

啊，希望我的也能这样绝处逢生~
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16楼2014-07-25 13:03:37
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张李云

金虫 (正式写手)
引用回帖:
16楼: Originally posted by W格子 at 2014-07-25 13:03:37
啊，希望我的也能这样绝处逢生~...

祝福
17楼2014-07-28 08:55:08
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小胖怂

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
12楼: Originally posted by 张李云 at 2014-07-25 10:51:44
同意，前一阵子，我养的Raw 264.7的时候也遇到同样的问题，稀疏，生长缓慢，都想放弃了，于是有四五天没管他们，结果反而长满了。柳暗花明的感觉。...

你好，请问能不能分一瓶RAW 264.7给我呢？谢谢啦
今天不知道为什么发不出去站内信o(╯□╰)o
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18楼2014-10-08 10:07:14
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bbwu8802

新虫 (初入文坛)
内容已删除
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19楼2014-10-14 11:52:10
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日子妞儿

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by W格子 at 2014-07-24 23:08:08
嗯 的确是特别稀。 刚复苏的时候都不贴壁，就留下零星的一点细胞坚强的长着~   
我不知道是不是我冻存的时候在4℃和-20℃放的时间太长了，分别都有1h吧，对细胞有影响了？之后是-80℃12h，然后转入液氮罐。
冻存 ...

10%的血清就够了
这个并不是越多越好的
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我是黑妞儿 哈哈
20楼2014-12-17 09:56:35
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