应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » RAW264.7复苏细胞不贴壁 生长缓慢是怎么回事？
252/3返回列表上一页123下一页
查看: 5144  |  回复: 24
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

一旺百旺

新虫 (著名写手)
首先看看细胞密度，包括没有贴壁的，大概知道你冻存的时候是不是细胞密度太低。如果太低状态不好也正常，细胞生长有一定的密度，要不生长很慢。到最后细胞状态可能也不会太好。复苏大约五个小时以后就要看看细胞状态，该加血清加血清，该换液就换液。很大程度上你冻的时候没有冻好，比如消化的时间不对，还有复苏的时候离心转速，还有复苏的时候可以用培养液离心两次来清洗。

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下(3人) 回复此楼
11楼2014-07-25 10:08:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

张李云

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 那个 at 2014-07-23 12:44:09
慢慢等一下吧
只要没染菌，慢慢养着吧，就别老折腾它们了。

同意，前一阵子，我养的Raw 264.7的时候也遇到同样的问题，稀疏，生长缓慢，都想放弃了，于是有四五天没管他们，结果反而长满了。柳暗花明的感觉。
赞一下(4人) 回复此楼
科研之路不平坦……
12楼2014-07-25 10:51:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

W格子

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by ssssllllnnnn at 2014-07-25 09:48:24
细胞冻存效果不好，大部分细胞不能复苏。少量细胞存活需要时间慢慢长起来，耐心等待吧。应该没有什么问题。

至于冻存细胞，我这里非常简单：用含10% DMSO全血清冻存，也不需要逐步降温的复杂过程，就是把细胞放在 ...

谢谢你，又给了我点儿信心~
我现在也不知道是哪里出了问题，下次冻存的时候试试你的冻存液。不过没有什么特制的冻存盒，不知道您讲的是个什么样的盒子。直接放泡沫盒吧。
赞一下 回复此楼
13楼2014-07-25 12:53:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

W格子

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by zszhxmc at 2014-07-25 09:52:48
关于RAW264.7我之前培养的时候确实碰到这个问题，如果传代密度低的话，这个细胞的生长状态就不太好！...

原来大家也遇到过类似的问题，那我再等等吧，希望能长起来
赞一下 回复此楼
14楼2014-07-25 12:55:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

W格子

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
11楼: Originally posted by 一旺百旺 at 2014-07-25 10:08:59
首先看看细胞密度，包括没有贴壁的，大概知道你冻存的时候是不是细胞密度太低。如果太低状态不好也正常，细胞生长有一定的密度，要不生长很慢。到最后细胞状态可能也不会太好。复苏大约五个小时以后就要看看细胞状态 ...

好的。谢谢建议，下次做的时候特别注意一下。
因为这个细胞有时候特别不好消化，可能我上次冻存前消化的时间长了（至少3min），虽然细胞浓度挺高的但细胞状态可能已经不好了。
细胞房那个就离心机转速有点不稳定了，是不是也有影响啊？会有机械损伤？
复苏的洗两次，是要洗去DMSO吗？它的影响特别大吗？
赞一下 回复此楼
15楼2014-07-25 13:02:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

W格子

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
12楼: Originally posted by 张李云 at 2014-07-25 10:51:44
同意，前一阵子，我养的Raw 264.7的时候也遇到同样的问题，稀疏，生长缓慢，都想放弃了，于是有四五天没管他们，结果反而长满了。柳暗花明的感觉。...

啊，希望我的也能这样绝处逢生~
赞一下 回复此楼
16楼2014-07-25 13:03:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

张李云

金虫 (正式写手)
引用回帖:
16楼: Originally posted by W格子 at 2014-07-25 13:03:37
啊，希望我的也能这样绝处逢生~...

祝福
17楼2014-07-28 08:55:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小胖怂

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
12楼: Originally posted by 张李云 at 2014-07-25 10:51:44
同意，前一阵子，我养的Raw 264.7的时候也遇到同样的问题，稀疏，生长缓慢，都想放弃了，于是有四五天没管他们，结果反而长满了。柳暗花明的感觉。...

你好，请问能不能分一瓶RAW 264.7给我呢？谢谢啦
今天不知道为什么发不出去站内信o(╯□╰)o
赞一下 回复此楼
18楼2014-10-08 10:07:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bbwu8802

新虫 (初入文坛)
内容已删除
回复此楼
19楼2014-10-14 11:52:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

日子妞儿

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by W格子 at 2014-07-24 23:08:08
嗯 的确是特别稀。 刚复苏的时候都不贴壁，就留下零星的一点细胞坚强的长着~   
我不知道是不是我冻存的时候在4℃和-20℃放的时间太长了，分别都有1h吧，对细胞有影响了？之后是-80℃12h，然后转入液氮罐。
冻存 ...

10%的血清就够了
这个并不是越多越好的
赞一下 回复此楼
我是黑妞儿 哈哈
20楼2014-12-17 09:56:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 W格子 的主题更新
252/3返回列表上一页123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 求调剂 +4 yunziaaaaa 2026-03-01 4/200 2026-03-01 23:45 by L135790
[考研] 材料化工调剂 +12 今夏不夏 2026-03-01 13/650 2026-03-01 23:32 by L135790
[考研] 265分求调剂不调专业和学校有行学上就 +6 礼堂丁真258 2026-02-28 8/400 2026-03-01 22:50 by jian_
[基金申请] 成果系统访问量大，请一小时后再尝试。---NSFC啥时候好哦，已经两天这样了 +4 NSFC2026我来了 2026-02-28 4/200 2026-03-01 22:37 by 铁门栓
[考研] 275求调剂 +3 明远求学 2026-03-01 3/150 2026-03-01 22:29 by 刘兵
[考研] 材料类求调剂 +10 wana_kiko 2026-02-28 12/600 2026-03-01 22:10 by 海嵙Y
[考研] 26考研报考西工大材料308分求调剂 +3 weizhong123 2026-03-01 3/150 2026-03-01 21:42 by 公瑾逍遥
[考研] 272求调剂 +6 田智友 2026-02-28 6/300 2026-03-01 21:40 by 公瑾逍遥
[考研] 299求调剂 +3 Y墨明棋妙Y 2026-02-28 5/250 2026-03-01 21:01 by tangxiaotian
[考研] 化工299分求调剂 一志愿985落榜 +5 嘻嘻(*^ω^*) 2026-03-01 5/250 2026-03-01 19:47 by 无际的草原
[考研] 一志愿中南大学理学化学 +4 15779376950 2026-03-01 5/250 2026-03-01 19:00 by Fff-1
[考研] 0856材料求调剂 +11 hyf hyf hyf 2026-02-28 12/600 2026-03-01 18:57 by 18137688336
[考研] 295求调剂 +7 19171856320 2026-02-28 7/350 2026-03-01 18:54 by 18137688336
[考研] 321求调剂一志愿东北林业大学材料与化工英二数二 +4 虫虫虫虫虫7 2026-03-01 7/350 2026-03-01 16:52 by caszguilin
[考研] 303求调剂 +4 今夏不夏 2026-03-01 4/200 2026-03-01 14:46 by 嘟嘟小浣熊
[考研] 298求调剂 +9 人间唯你是清欢 2026-02-28 12/600 2026-03-01 14:23 by Ducount.Y
[考博] 博士自荐 +4 kkluvs 2026-02-28 4/200 2026-03-01 10:19 by 馥安馥安
[论文投稿] 求助coordination chemistry reviews 的写作模板 10+3 ljplijiapeng 2026-02-27 4/200 2026-03-01 09:07 by babero
[考研] 材料调剂 +4 爱擦汗的可乐冰 2026-02-28 4/200 2026-03-01 00:38 by 猫猫球alter
[高分子] 求环氧树脂研发1名 +3 孙xc 2026-02-25 11/550 2026-02-28 16:57 by ichall
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭