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一旺百旺

新虫 (著名写手)

首先看看细胞密度,包括没有贴壁的,大概知道你冻存的时候是不是细胞密度太低。如果太低状态不好也正常,细胞生长有一定的密度,要不生长很慢。到最后细胞状态可能也不会太好。复苏大约五个小时以后就要看看细胞状态,该加血清加血清,该换液就换液。很大程度上你冻的时候没有冻好,比如消化的时间不对,还有复苏的时候离心转速,还有复苏的时候可以用培养液离心两次来清洗。

[ 发自小木虫客户端 ]
11楼2014-07-25 10:08:59
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张李云

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 那个 at 2014-07-23 12:44:09
慢慢等一下吧
只要没染菌,慢慢养着吧,就别老折腾它们了。

同意,前一阵子,我养的Raw 264.7的时候也遇到同样的问题,稀疏,生长缓慢,都想放弃了,于是有四五天没管他们,结果反而长满了。柳暗花明的感觉。
科研之路不平坦……
12楼2014-07-25 10:51:44
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W格子

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
9楼: Originally posted by ssssllllnnnn at 2014-07-25 09:48:24
细胞冻存效果不好,大部分细胞不能复苏。少量细胞存活需要时间慢慢长起来,耐心等待吧。应该没有什么问题。

至于冻存细胞,我这里非常简单:用含10% DMSO全血清冻存,也不需要逐步降温的复杂过程,就是把细胞放在 ...

谢谢你,又给了我点儿信心~
我现在也不知道是哪里出了问题,下次冻存的时候试试你的冻存液。不过没有什么特制的冻存盒,不知道您讲的是个什么样的盒子。直接放泡沫盒吧。
13楼2014-07-25 12:53:25
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W格子

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
10楼: Originally posted by zszhxmc at 2014-07-25 09:52:48
关于RAW264.7我之前培养的时候确实碰到这个问题,如果传代密度低的话,这个细胞的生长状态就不太好!...

原来大家也遇到过类似的问题,那我再等等吧,希望能长起来
14楼2014-07-25 12:55:00
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W格子

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
11楼: Originally posted by 一旺百旺 at 2014-07-25 10:08:59
首先看看细胞密度,包括没有贴壁的,大概知道你冻存的时候是不是细胞密度太低。如果太低状态不好也正常,细胞生长有一定的密度,要不生长很慢。到最后细胞状态可能也不会太好。复苏大约五个小时以后就要看看细胞状态 ...

好的。谢谢建议,下次做的时候特别注意一下。
因为这个细胞有时候特别不好消化,可能我上次冻存前消化的时间长了(至少3min),虽然细胞浓度挺高的但细胞状态可能已经不好了。
细胞房那个就离心机转速有点不稳定了,是不是也有影响啊?会有机械损伤?
复苏的洗两次,是要洗去DMSO吗?它的影响特别大吗?
15楼2014-07-25 13:02:36
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W格子

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
12楼: Originally posted by 张李云 at 2014-07-25 10:51:44
同意,前一阵子,我养的Raw 264.7的时候也遇到同样的问题,稀疏,生长缓慢,都想放弃了,于是有四五天没管他们,结果反而长满了。柳暗花明的感觉。...

啊,希望我的也能这样绝处逢生~
16楼2014-07-25 13:03:37
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张李云

金虫 (正式写手)

引用回帖:
16楼: Originally posted by W格子 at 2014-07-25 13:03:37
啊,希望我的也能这样绝处逢生~...

祝福
17楼2014-07-28 08:55:08
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小胖怂

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
12楼: Originally posted by 张李云 at 2014-07-25 10:51:44
同意,前一阵子,我养的Raw 264.7的时候也遇到同样的问题,稀疏,生长缓慢,都想放弃了,于是有四五天没管他们,结果反而长满了。柳暗花明的感觉。...

你好,请问能不能分一瓶RAW 264.7给我呢?谢谢啦
今天不知道为什么发不出去站内信o(╯□╰)o
18楼2014-10-08 10:07:14
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bbwu8802

新虫 (初入文坛)

内容已删除
19楼2014-10-14 11:52:10
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日子妞儿

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by W格子 at 2014-07-24 23:08:08
嗯 的确是特别稀。 刚复苏的时候都不贴壁,就留下零星的一点细胞坚强的长着~   
我不知道是不是我冻存的时候在4℃和-20℃放的时间太长了,分别都有1h吧,对细胞有影响了?之后是-80℃12h,然后转入液氮罐。
冻存 ...

10%的血清就够了
这个并不是越多越好的
我是黑妞儿 哈哈
20楼2014-12-17 09:56:35
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